納米鋁佐劑的制備與生物相容性評價及作為腫瘤疫苗佐劑對小鼠H-,22-肝癌治療的實驗研究.pdf

1、[目的] ①研究納米鋁的制備及表征。 ②納米鋁佐劑生物相容性評價。 ③以納米鋁為腫瘤疫苗佐劑預(yù)防小鼠H<,22>肝癌的研究。 ④以納米鋁為腫瘤疫苗佐劑治療小鼠H22肝癌的研究。 [方法] ①采用微乳法制備納米鋁佐劑，運用透射電子顯微鏡(transmission electron microscope，TEMl、X射線衍射分析(x-ray diffraction，XRD)、掃描電子顯微鏡(s

2、canning electron microscopy，SEM)、能譜儀(energy dispersive spectrometer,EDS)及圖象分析等技術(shù)進行特征性研究； ②采用CCK-8實驗、溶血試驗、微核試驗、小鼠LDso(median lethal dose)檢測等方法評價納米鋁佐劑的生物相容性； ③采用體內(nèi)試驗計算腫瘤質(zhì)量抑制率、CCK-8法測定細胞毒殺傷活性、ELISA法檢測血清細胞因子(IL-4、IFN

3、-γ)濃度等，并采用樹突狀細胞吞噬試驗來探討納米佐劑吸附自體腫瘤疫苗作用的機制，綜合這些指標來評價納米鋁腫瘤疫苗佐劑對小鼠H<,22>肝癌預(yù)防及治療的免疫療效研究。 [結(jié)果] ①制備的納米鋁佐劑表征：TEM檢測顯示納米鋁佐劑為近圓形、電子密度高、大小較一致、分散良好；圖像分析儀粒徑統(tǒng)計學(xué)分析其平均粒徑約為100nm；EDS證實制備的納米鋁只含有Al與O兩種元素；XRD顯示制備的納米粒子各衍射峰所對應(yīng)的面間距(d值)與粉末

4、衍射標準聯(lián)合會(JCPDS)編制的代表物質(zhì)為Al(OO)H<,3>的PDF(Powder Diffraction File)卡片d值吻合一致。 ②L-929細胞CCK-8實驗、溶血試驗、微核實驗證實納米鋁佐劑無溶血作用、毒性低及無致畸致突變作用、符合生物材料的安全性要求，小鼠LD<,50>檢測發(fā)現(xiàn)納米鋁佐劑LD<,50>為10.33g/kg，具有較廣的安全值范圍。 ③在預(yù)防實驗中，納米鋁佐劑吸附自體腫瘤疫苗組的腫瘤質(zhì)量抑

5、瘤率分別為95.49％，明顯高于其他組；細胞毒殺傷實驗結(jié)果表明：當(dāng)效靶比為100:1時，納米鋁佐劑吸附疫苗組僅與對照組的細胞毒殺傷活性有明顯差異；而當(dāng)效靶比為50:1與25:1時，納米鋁佐劑吸附疫苗組的細胞毒殺傷活性明顯高于普通鋁吸附自體腫瘤疫苗組、單純腫瘤疫苗組以及對照組；納米鋁佐劑吸附自體腫瘤疫苗組的細胞因子IFN-γ的平均濃度分別為18.8±8.81pg/ml，明顯高于其他各組，有統(tǒng)計學(xué)意義；而納米鋁佐劑吸附自體腫瘤疫苗組的細胞因

6、子IL-4的水平均低于檢出下限，明顯低于濃度為7.53±1.90 pg/ml的陰性對照組。 ④在治療實驗中，納米鋁佐劑吸附自體腫瘤疫苗組的腫瘤質(zhì)量抑瘤率分別為80.1％，明顯高于其他組；細胞毒實驗結(jié)果表明：當(dāng)效靶比為100:1時，納米鋁佐劑吸附自體腫瘤疫苗組僅與對照組的細胞毒殺傷活性有明顯差異；而當(dāng)效靶比為50L1與25:1時，納米鋁佐劑吸附自體腫瘤疫苗組的細胞毒殺傷活性明顯高于普通鋁吸附自體腫瘤疫苗組、單純腫瘤疫苗組以及對照組

7、；納米鋁佐劑吸附自體腫瘤疫苗組的細胞因子IFN-γ的平均濃度分別為16.1±4．67pg/ml，明顯高于其他各組，有統(tǒng)計學(xué)意義，而納米鋁佐劑吸附自體腫瘤疫苗組的細胞因子IL-4的水平低于檢出下限，明顯低于濃度為15.44±3.79pg/ml的對照組。同時相差顯微鏡下觀察，納米佐劑比較普通鋁佐劑更易被樹突細胞所吞噬，更易啟動免疫反應(yīng)的第一步。 [結(jié)論] ①應(yīng)用微乳法己成功制備了納米鋁佐劑。 ②制備的納米鋁佐劑具有良