北冬蟲夏草主要有效成分的含量測定研究.pdf

1、北蟲草[Cordyceps militaris(L.ex Fr.) Link]是我國一種重要藥用真菌，具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗氧化、降血糖和保肝等藥理作用，用于肺結(jié)核、老人虛弱和貧血等疾病的治療。目前衡量北蟲草質(zhì)量的重要指標是有效成分甘露醇、蟲草多糖和蟲草核苷的含量測定，目前這三種主要有效成分的測定方法很多，測定結(jié)果也有較大差異。本論文運用高效陰離子色譜、高效液相等先進手段，研究北蟲草中甘露醇、蟲草多糖和蟲草核苷的含量測定，并與目前經(jīng)常

2、使用的方法進行比較，為北蟲草中有效成分的準確測定建立科學依據(jù)。
　　 目前甘露醇最常用的測定方法是比色法，其最大的缺點在于無法去除類似糖醇的干擾。本實驗運用HPLC法和高效離子色譜法兩種方法對北蟲草中甘露醇進行測定，并與比色法進行比較。HPLC法和高效離子色譜法這兩個方法都能將甘露醇與其它單糖或糖醇有效分離，方法學研究發(fā)現(xiàn)，這兩種方法重復性好、精密度高和重現(xiàn)性好，且加樣回收率在95-105％之間，適合于北蟲草中甘露醇的測定。對三

3、種方法測定北蟲草中甘露醇含量進行比較，發(fā)現(xiàn)HPLC法和高效離子色譜法測定值間無顯著差異，而比色法測得值明顯高于HPLC法及離子色譜法，并有顯著性差異。因此，高效液相法和高效陰離子色譜法都能將北蟲草中干擾物質(zhì)有效分離，是準確測定北蟲草中甘露醇的含量的方法。
　　 北蟲草多糖的含量測定基本方法為苯酚-濃硫酸法，由于不同文獻中蟲草多糖的測定結(jié)果相差非常大。為準確測定北蟲草中甘露醇含量，本試驗運用高效陰離子法測定干擾物質(zhì)，比較水提醇沉和

4、醇提水提兩種多糖前處理后的測定液中干擾物質(zhì)的含量，以及對多糖含量測定的影響，建立準確的多糖測定方法。結(jié)果發(fā)現(xiàn)水提醇沉法前處理后，提取液中干擾物質(zhì)仍超過10％，而且步驟多，重復性差。而醇提水提法簡便、快速、精確，處理后的提取液干擾物質(zhì)低于1％，適用于北蟲草中多糖測定的前處理。同時對提取方法進行優(yōu)化，測定的最佳方法為，先用80％乙醇提取2次，提取溫度100°，提取時間3小時，液料比1∶100，此方法穩(wěn)定，重復性好，適合北蟲草中多糖含量測定。

5、
　　 核苷類成分是北蟲草中主要活性成分，通過核苷類指紋圖譜發(fā)現(xiàn)，除已知核苷類成分蟲草素、腺苷外，還有一個含量較高的未知峰。為明確指紋圖譜中未知峰化學成分，運用NKA-Ⅱ大孔吸附樹脂和C-18分離純化得到了未知峰的結(jié)晶，通過1HNMR，13CNMR、質(zhì)譜等波譜分析，并文獻報道數(shù)據(jù)進行比對，鑒定出化合物為N6-（2-羥乙基）-腺苷。運用高效液相法，建立了蟲草素、腺苷和N6-(2-羥乙基)腺苷的測定方法。最優(yōu)提取條件為超聲30min