針刺對新生大鼠缺血缺氧性腦損傷皮層神經(jīng)營養(yǎng)因子及受體基因表達(dá)的影響.pdf

1、汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士研究生畢業(yè)論文I目錄目錄……………………………………………………………….……….……………..I中文摘要…………………………………………………………………….…………………..Ⅲ英文摘要.....................................................................................................................

2、..................Ⅴ縮略語表……………………………………………………………...…………………………Ⅷ第1章前言..................................................................................................................................1第2章材料和方法1實驗動物………………..………

3、………………………………………………………..…..32分組……………………..…………………………………………………………………....33主要試劑及試劑盒…..………………………………………………………………………34試劑組成、配制……………………….…………………………………………………….45主要儀器、設(shè)備…………………………..…………………………………………………46實時定量PCR使用引物列表….……………………………………

4、.………………………57動物模型制作過程………………………………….……………………………………….58針刺取穴及治療方法………………………………….…………………………………….59動物取材……………………………………….…………………………………………….610神經(jīng)營養(yǎng)因子及受體基因表達(dá)譜分析……...…………………………………………….610.1RNA抽提…..……….……………………………………………………..………………610

5、.2RNA質(zhì)量檢測…..……….………………………………………………..………….…...710.3探針合成（AMPOLABELINGLPR標(biāo)記法）…..……….………………………………...810.4芯片雜交………..……….……………………………………………………………....9汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士研究生畢業(yè)論文III針刺對新生大鼠缺血缺氧性腦損傷皮層神經(jīng)針刺對新生大鼠缺血缺氧性腦損傷皮層神經(jīng)營養(yǎng)因子及受體基因表達(dá)的影響營養(yǎng)因子及受體

6、基因表達(dá)的影響摘要背景背景缺血缺氧性腦病是新生兒期危害最大的常見疾病之一，常導(dǎo)致新生兒死亡以及幸存者后期智力低下、癲癇和腦性癱瘓等嚴(yán)重的神經(jīng)功能殘損，嚴(yán)重危害了新生兒的生命健康和生存質(zhì)量。西醫(yī)學(xué)迄今為止尚無有效的治療方法，而中醫(yī)針刺在治療缺血缺氧性腦病方面具有獨到之處。根據(jù)中醫(yī)理論，本課題組以“補先天之精，調(diào)后天之本，充腦髓，壯骨，解痙”為原則，在臨床上采用針刺任脈、督脈及膀胱經(jīng)諸穴位治療新生兒缺血缺氧性腦病患兒26例，均有不同程度的改

7、善甚或痊愈，取得滿意的臨床效果，且影像學(xué)檢查顯示治療后大腦皮層增厚，外部腦積水消失。但針刺治療缺血缺氧性腦病的機理目前尚未完全明確。本課題組既往研究已證明針刺可促進(jìn)缺血缺氧損傷大腦皮層神經(jīng)干細(xì)胞增殖，并分化為神經(jīng)元。另有許多研究顯示針刺在治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病過程中能促使人體產(chǎn)生神經(jīng)營養(yǎng)因子。因此我們設(shè)想：針刺可能通過改善缺血缺氧性腦損傷患兒腦內(nèi)的微環(huán)境（如促進(jìn)神經(jīng)營養(yǎng)因子的分泌等）從而激發(fā)腦內(nèi)內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞的增殖、分化潛能，以補充在缺血缺

8、氧性腦損傷中喪失的神經(jīng)細(xì)胞，達(dá)到改善缺血缺氧性腦病癥狀的目的?；蛐酒夹g(shù)是近年來出現(xiàn)并快速發(fā)展起來的一項前沿生物技術(shù)，具有高效、高信息量的突出優(yōu)點，可同時檢測成千上萬個基因，能夠?qū)⑴c疾病過程的眾多基因的表達(dá)進(jìn)行快捷、有效的篩查，為針刺治療缺血缺氧性腦病的基礎(chǔ)和臨床研究提供了新的技術(shù)手段。目的目的在缺血缺氧性腦病動物模型上模擬臨床針刺任脈、督脈及膀胱經(jīng)治療新生兒缺血缺氧性腦病的過程，用基因芯片檢測針刺治療后動物模型大腦皮層神經(jīng)營養(yǎng)因子

9、及受體基因表達(dá)的變化，探討針刺治療缺血缺氧性腦病的分子機制，為臨床針刺治療新生兒缺血缺氧性腦病提供新的理論依據(jù)。方法方法新生7天齡SD大鼠結(jié)扎左側(cè)頸總動脈并缺氧2小時制作新生鼠缺血缺氧性腦病模型。實驗動物分為針刺組和對照組。針刺組于建模次日開始行針刺治療，每天針刺任脈、督脈及膀胱經(jīng)諸穴位一次，共針刺14天，對照組建模后不作針刺處理。針刺治療結(jié)束后，兩組動物均斷頸處死，取左側(cè)頂枕葉缺血缺氧病變明顯部位的大腦皮層，抽提總RNA，用GEArr