腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子修飾的神經(jīng)干細(xì)胞移植對(duì)大鼠缺血性腦損傷的治療作用.pdf

1、本研究首先分離了新生大鼠腦部不同部位的神經(jīng)干細(xì)胞，體外培養(yǎng)、傳代、鑒定，證明不同腦區(qū)均可分離培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞。并對(duì)海馬來源的神經(jīng)干細(xì)胞進(jìn)行特征鑒定，證明海馬來源的神經(jīng)干細(xì)胞可以分化出膽堿能神經(jīng)細(xì)胞，具有海馬神經(jīng)元的特征。然后通過RT-PCR從人胎腦組織總RNA中擴(kuò)增出BDNF的cDNA全長片段，構(gòu)建雙拷貝逆轉(zhuǎn)錄病毒載體pLXSN-BDNF，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染導(dǎo)入PA317，感染NSCs，獲得高度表達(dá)BDNF的NSCs-BDNF基因工程干細(xì)胞，通過

2、對(duì)PC12-TrkB細(xì)胞以及對(duì)體外培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元的影響檢測其生物學(xué)活性，證明該基因工程干細(xì)胞可分泌活性BDNF蛋白。最后，線栓法制作大鼠大腦中動(dòng)脈阻塞(MCAO)模型，將NSCs-BDNF經(jīng)立體定向技術(shù)移植到模型大鼠病側(cè)海馬區(qū)，觀察到有行為學(xué)的改善；腦片BrdU染色顯示在細(xì)胞移植區(qū)呈現(xiàn)陽性反應(yīng)，證明移植細(xì)胞已存活并增殖；腦片尼氏染色顯示基因工程細(xì)胞移植后缺血損傷海馬神經(jīng)元丟失減少。以期為BDNF基因修飾的神經(jīng)干細(xì)胞移植治療缺血性腦損傷