促性腺激素對小鼠卵巢VEGF、Survivin的表達及玻璃化凍存移植后產(chǎn)子率的影響.pdf

1、卵巢的深低溫凍存后移植已逐漸成為青年和未成年女性癌癥患者保存生育力的一個策略，但凍存及無血管吻合移植后卵泡的大量丟失使移植卵巢功能壽命縮短。因此，尋找有效的途徑解決凍存及移植卵泡丟失的問題成為女性生育力體外保存的研究熱點。本研究組前期工作顯示HMG體外短暫干預可使小鼠移植卵巢血流灌注時間提前、FSH干預下綿羊凍存移植卵巢卵泡存活率提高，這些僅僅是從卵泡存活的角度觀察到的Gn作用，尚缺少對相關(guān)機制及生育力保存觀察的實驗依據(jù)。故本研究將分別

2、通過FSH、LH對小鼠卵巢進行體外干預，觀察其對血管生成和抗凋亡相關(guān)因子表達及干預對玻璃化凍存卵巢原位移植后的產(chǎn)子影響，希望能為促性腺激素干預提高卵巢移植后生殖力提供科學依據(jù)。
　　文章從以下兩部分就促性腺激素對小鼠卵巢VEGF、Survivin的表達及玻璃化凍存移植后產(chǎn)子率的影響進行了論述。
　　第一部分：重組人FSH、LH對培養(yǎng)小鼠卵巢VEGF和Survivin表達的影響
　　目的：探索重組人FSH、LH對小鼠卵巢

3、體外培養(yǎng)后血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）和存活素（Survivin）表達的影響。方法：實驗分為新鮮對照組、非干預培養(yǎng)組和Gn干預培養(yǎng)組。Gn干預組又分為FSH和LH兩組，各組干預濃度均分為0.15 IU/ml、0.3 IU/ml、0.6 IU/ml三個濃度組。將新鮮取材8周齡小鼠（132只）的每只4個半卵巢置于非干預對照組和三個干預濃度液中，于體外培養(yǎng)3h、6h、12h、24h后通過免疫組織化法、RT-PCR、Elisa觀察半卵巢VEGF

4、、Survivin的表達并進行分析。結(jié)果：免疫組化和Elisa顯示FSH、LH干預組培養(yǎng)6h、12hVEGF表達量均高于非干預培養(yǎng)組，免疫組化、Elisa和RT-PCR均顯示FSH、LH干預組培養(yǎng)12小時Survivin表達量均高于非干預培養(yǎng)組。培養(yǎng)24小時0.3 IU/ml LH在維持VEGF表達明顯高于其他干預組，P＜0.05。FSH、LH干預后，VEGF和Survivin的變化，在0.01水平（雙側(cè)）上顯著相關(guān)，Pearson相關(guān)

5、性為0.792，P＜0.001。結(jié)論：FSH、LH體外干預可上調(diào)小鼠VEGF、Survivin表達，且VEGF和Survivin的上調(diào)呈正相關(guān)，培養(yǎng)液中0.3IU/mL LH在維持高表達VEGF、Survivin上明顯優(yōu)于其它實驗組。
　　第二部分 LH干預對玻璃化凍存小鼠卵巢異體原位移植后產(chǎn)子率的影響
　　目的：研究LH干預對玻璃化凍存小鼠卵巢異體原位移植后的存活及功能恢復情況。方法：以C57BL/6J小鼠（黑毛色）為卵巢

6、供體，以C57BL/6J-Tyr c-2J-J的白毛鼠（系毛色基因突變鼠）為受體，隨機分為正常對照組、新鮮移植組、非干預玻璃化移植組和LH干預玻璃化移植組。每組白毛鼠和黑毛鼠各6只，通過本交實驗觀察產(chǎn)仔情況。正常對照組為雄性白毛鼠直接與黑毛雌性性小鼠合籠；新鮮移植組為將黑毛小鼠卵巢進行囊內(nèi)雙側(cè)完整剝離后，分別移植于去卵巢白毛小鼠兩側(cè)的卵巢囊內(nèi)；玻璃化移植組分為非LH干預組與0.3IU/ml的LH干預組，用同樣的方法剝離黑毛小鼠的卵巢，玻

7、璃化凍存3天后移植。移植后通過觀察動情周期和產(chǎn)下黑毛小鼠的情況對生育率的保護效率進行觀察。結(jié)果：在移植后各實驗組動情周期均恢復，新鮮移植組為6.5±1.04天，玻璃化移植組時間為9.33±1.21天，LH玻璃化移植組7.16±1.17天，玻璃化移植組動情周期恢復時間較新鮮移植組和LH玻璃化移植組延長，有統(tǒng)計學意義，P＜0.05；合籠后各實驗組小鼠均正常妊娠，正常對照組5.83±1.94只/窩，新鮮移植組4.67±1.37只/窩，玻璃化移