促性腺激素對(duì)小鼠卵巢VEGF、Survivin的表達(dá)及玻璃化凍存移植后產(chǎn)子率的影響.pdf

1、卵巢的深低溫凍存后移植已逐漸成為青年和未成年女性癌癥患者保存生育力的一個(gè)策略，但凍存及無血管吻合移植后卵泡的大量丟失使移植卵巢功能壽命縮短。因此，尋找有效的途徑解決凍存及移植卵泡丟失的問題成為女性生育力體外保存的研究熱點(diǎn)。本研究組前期工作顯示HMG體外短暫干預(yù)可使小鼠移植卵巢血流灌注時(shí)間提前、FSH干預(yù)下綿羊凍存移植卵巢卵泡存活率提高，這些僅僅是從卵泡存活的角度觀察到的Gn作用，尚缺少對(duì)相關(guān)機(jī)制及生育力保存觀察的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。故本研究將分別

2、通過FSH、LH對(duì)小鼠卵巢進(jìn)行體外干預(yù)，觀察其對(duì)血管生成和抗凋亡相關(guān)因子表達(dá)及干預(yù)對(duì)玻璃化凍存卵巢原位移植后的產(chǎn)子影響，希望能為促性腺激素干預(yù)提高卵巢移植后生殖力提供科學(xué)依據(jù)。
　　文章從以下兩部分就促性腺激素對(duì)小鼠卵巢VEGF、Survivin的表達(dá)及玻璃化凍存移植后產(chǎn)子率的影響進(jìn)行了論述。
　　第一部分：重組人FSH、LH對(duì)培養(yǎng)小鼠卵巢VEGF和Survivin表達(dá)的影響
　　目的：探索重組人FSH、LH對(duì)小鼠卵巢

3、體外培養(yǎng)后血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）和存活素（Survivin）表達(dá)的影響。方法：實(shí)驗(yàn)分為新鮮對(duì)照組、非干預(yù)培養(yǎng)組和Gn干預(yù)培養(yǎng)組。Gn干預(yù)組又分為FSH和LH兩組，各組干預(yù)濃度均分為0.15 IU/ml、0.3 IU/ml、0.6 IU/ml三個(gè)濃度組。將新鮮取材8周齡小鼠（132只）的每只4個(gè)半卵巢置于非干預(yù)對(duì)照組和三個(gè)干預(yù)濃度液中，于體外培養(yǎng)3h、6h、12h、24h后通過免疫組織化法、RT-PCR、Elisa觀察半卵巢VEGF

4、、Survivin的表達(dá)并進(jìn)行分析。結(jié)果：免疫組化和Elisa顯示FSH、LH干預(yù)組培養(yǎng)6h、12hVEGF表達(dá)量均高于非干預(yù)培養(yǎng)組，免疫組化、Elisa和RT-PCR均顯示FSH、LH干預(yù)組培養(yǎng)12小時(shí)Survivin表達(dá)量均高于非干預(yù)培養(yǎng)組。培養(yǎng)24小時(shí)0.3 IU/ml LH在維持VEGF表達(dá)明顯高于其他干預(yù)組，P＜0.05。FSH、LH干預(yù)后，VEGF和Survivin的變化，在0.01水平（雙側(cè)）上顯著相關(guān)，Pearson相關(guān)

5、性為0.792，P＜0.001。結(jié)論：FSH、LH體外干預(yù)可上調(diào)小鼠VEGF、Survivin表達(dá)，且VEGF和Survivin的上調(diào)呈正相關(guān)，培養(yǎng)液中0.3IU/mL LH在維持高表達(dá)VEGF、Survivin上明顯優(yōu)于其它實(shí)驗(yàn)組。
　　第二部分 LH干預(yù)對(duì)玻璃化凍存小鼠卵巢異體原位移植后產(chǎn)子率的影響
　　目的：研究LH干預(yù)對(duì)玻璃化凍存小鼠卵巢異體原位移植后的存活及功能恢復(fù)情況。方法：以C57BL/6J小鼠（黑毛色）為卵巢

6、供體，以C57BL/6J-Tyr c-2J-J的白毛鼠（系毛色基因突變鼠）為受體，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、新鮮移植組、非干預(yù)玻璃化移植組和LH干預(yù)玻璃化移植組。每組白毛鼠和黑毛鼠各6只，通過本交實(shí)驗(yàn)觀察產(chǎn)仔情況。正常對(duì)照組為雄性白毛鼠直接與黑毛雌性性小鼠合籠；新鮮移植組為將黑毛小鼠卵巢進(jìn)行囊內(nèi)雙側(cè)完整剝離后，分別移植于去卵巢白毛小鼠兩側(cè)的卵巢囊內(nèi)；玻璃化移植組分為非LH干預(yù)組與0.3IU/ml的LH干預(yù)組，用同樣的方法剝離黑毛小鼠的卵巢，玻

7、璃化凍存3天后移植。移植后通過觀察動(dòng)情周期和產(chǎn)下黑毛小鼠的情況對(duì)生育率的保護(hù)效率進(jìn)行觀察。結(jié)果：在移植后各實(shí)驗(yàn)組動(dòng)情周期均恢復(fù)，新鮮移植組為6.5±1.04天，玻璃化移植組時(shí)間為9.33±1.21天，LH玻璃化移植組7.16±1.17天，玻璃化移植組動(dòng)情周期恢復(fù)時(shí)間較新鮮移植組和LH玻璃化移植組延長，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05；合籠后各實(shí)驗(yàn)組小鼠均正常妊娠，正常對(duì)照組5.83±1.94只/窩，新鮮移植組4.67±1.37只/窩，玻璃化移