玻璃化凍存對鯽魚卵細(xì)胞的影響.pdf

1、本文對鯽魚（Carassius cuvieri）未成熟的卵細(xì)胞進(jìn)行玻璃化凍存，比較了三種不同的卵細(xì)胞分離方法的效果，分析了不同預(yù)平衡時間和溫度對魚卵細(xì)胞存活率的影響，篩選出最佳預(yù)平衡方法。通過對玻璃化凍存后魚卵細(xì)胞的存活率、琥珀酸脫氫酶(SDH)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量的檢測，篩選出適合魚卵細(xì)胞玻璃化凍存的玻璃化溶液配方及程序，并分析玻璃化凍存對鯽魚卵細(xì)胞的影響。
　　 (1)卵細(xì)胞分離方法的選擇

2、:比較卵細(xì)胞經(jīng)三種不同方法分離后的存活率及成熟率，表明酶消化法是一種簡單快速地分離魚卵細(xì)胞的方法，膠原酶因其特異性地水解膠原蛋白，而不損傷其它蛋白質(zhì)和組織的特點更適合于魚卵細(xì)胞的分離，其最適濃度和時間分別為0.4 mg·mL-1和10 min。
　　 (2)預(yù)平衡時間及溫度的選擇:卵細(xì)胞經(jīng)三步預(yù)平衡、洗脫后檢測存活率，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞存活率基本隨平衡時間的延長而降低，0℃下預(yù)平衡更優(yōu)于20℃。分析表明，在0℃下以各步平衡時間為10 mi

3、n進(jìn)行三步平衡效果較好。
　　 (3)玻璃化溶液的篩選:分析經(jīng)不同玻璃化溶液凍存后的卵細(xì)胞，檢測相關(guān)生理生化指標(biāo)，表明玻璃化凍存液VS4和VSd組的凍存效果較好，其組分分別為160 g·L-11，2-丙二醇，100 g·L-1二甲基亞砜，150 g·L-1甲醇，120 g·L-1乙酰胺，0.6mol·L-1蔗糖和30 g·L-1聚乙二醇;180 g·L-11，2-丙二醇，110 g·L-1甲醇，0.1 mol·L-1海藻糖和40

4、 g·L-1聚乙二醇。
　　 (4)玻璃化凍存對魚卵細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的影響:對凍存后魚卵細(xì)胞的存活率、SDH活性、SOD活性和MDA含量等進(jìn)行了初步研究，分析各項檢測指標(biāo)發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞活性隨著凍存天數(shù)的延長而逐漸下降，細(xì)胞膜受損程度逐漸上升，在凍存6d后，趨勢減弱。說明玻璃化凍存仍不能完全避免低溫對魚類卵細(xì)胞造成的冷凍損傷。
　　 上述實驗結(jié)果表明，以膠原酶消化法分離鯽魚卵細(xì)胞，將其在0℃下以各步平衡10min進(jìn)行三步預(yù)平衡，