間充質干細胞在玻璃化凍存人卵巢組織異種移植兔模型中的應用探索.pdf

1、背景:
　　當今社會中，罹患腫瘤的患者數量逐年提高且發(fā)病年齡有年輕化的趨勢，各類治療手段的不斷進步，使得患者的生存率改善，但治療的副作用迫使許多年輕女性失去生育能力，這部分人群有著恢復生育能力的強烈需求;此外，部分正常女性因個人原因、社會經濟等因素主觀上要求推遲自身的生育時間但卻面臨卵巢功能隨年齡增長日漸衰退的風險。因此，通過某種技術保存生育功能并在適當的時機進行移植恢復，包括內分泌功能和生育功能，是有現實意義的。卵巢組織冷凍保存

2、技術能夠實現在體外長期保存卵巢，多項實驗證明其正常卵泡的保存效率可達90％以上。卵巢組織的異種移植是恢復生育能力的途徑之一，但移植早期面臨缺血缺氧，可導致卵泡大量丟失;移植后期，因免疫排斥問題，亦可導致組織的壞死。間充質干細胞(MSCs)作為再生醫(yī)學領域內一種有巨大潛力的細胞，具有誘導分化和一定的免疫調節(jié)能力。將其應用于卵巢組織異種移植兔模型中國內外均未見報道。因此，研究MSCs在兔體內的走行以及對移植卵巢組織所起的作用的探索，包括局部

3、調節(jié)能力及組織再生能力，對于提高卵巢組織的移植效果具有重要的意義。
　　目的:
　　1、提高玻璃化凍存的效率，以期體外長期保存女性生育功能。
　　2、研究MSCs在人卵巢組織異種移植兔模型中的走行，在移植部位中發(fā)揮的免疫調節(jié)能力及組織修復能力，提高卵巢組織的存活能力。
　　3、尋找MSCs的最佳給藥方式。
　　方法:
　　將新鮮的卵巢組織通過玻璃化凍存的方法進行低溫保存，4周后進行復蘇，于2小時內進行

4、移植。選擇20只性成熟的雌性新西蘭大白兔作為人卵巢組織異種移植的受體，經去勢手術處理后隨機分配到4組中。經凍存-復蘇后的人卵巢組織移植到兔背肌內，按以下不同處理分成四組:1、MSC組:MSCs耳緣靜脈注射（1×106/kg）+等量生理鹽水肌注;2、FTY組:MSCs培養(yǎng)基耳緣靜脈注射+FTY720肌注(2mg/kg/d);3、 MFIV組:MSCs耳緣靜脈注射（1×106/kg）+FTY720肌注（2mg/kg/d）;4、MFIM組:M

5、SCs肌注(1×106/kg)+FTY720肌注(2mg/kg/d)。所有MSCs均于注射前用CM-Dil染料進行處理。移植前3天起除MSC組外，其余三組每天使用FTY720(2mg/kg)進行免疫抑制。所有移植物于移植后8周全部回收。移植物移植前用HE染色及電鏡評估組織的形態(tài)完整性;采用酶聯免疫法檢測兔外周血E2水平及IFN-γ水平;取新鮮抗凝全血檢測兔外周血中CD4及CD8淋巴細胞的比例;8周后記錄卵巢組織回收率及觀察肉眼形態(tài);回收

6、后移植物HE染色觀察組織形態(tài)及纖維化壞死率;取移植部位及其他全身實質器官用激光共聚焦觀察MSCs的走行情況。
　　結果:
　　1、使用卵巢組織玻璃化凍存的方法能較好的保存卵巢組織，包括卵泡、粒細胞及基質;
　　2、不同給藥方式給與的間充質干細胞均可以在體內游走，8周后不同部位定植細胞的數量為移植部位＞脾臟＞肺等其他實質器官;
　　3、FTY720聯合MSCs可以更好地減輕免疫排斥反應，維持卵巢組織分泌雌二醇，且降