間充質(zhì)干細(xì)胞在玻璃化凍存人卵巢組織異種移植兔模型中的應(yīng)用探索.pdf

1、背景:
　　當(dāng)今社會(huì)中，罹患腫瘤的患者數(shù)量逐年提高且發(fā)病年齡有年輕化的趨勢(shì)，各類治療手段的不斷進(jìn)步，使得患者的生存率改善，但治療的副作用迫使許多年輕女性失去生育能力，這部分人群有著恢復(fù)生育能力的強(qiáng)烈需求;此外，部分正常女性因個(gè)人原因、社會(huì)經(jīng)濟(jì)等因素主觀上要求推遲自身的生育時(shí)間但卻面臨卵巢功能隨年齡增長(zhǎng)日漸衰退的風(fēng)險(xiǎn)。因此，通過某種技術(shù)保存生育功能并在適當(dāng)?shù)臅r(shí)機(jī)進(jìn)行移植恢復(fù)，包括內(nèi)分泌功能和生育功能，是有現(xiàn)實(shí)意義的。卵巢組織冷凍保存

2、技術(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)在體外長(zhǎng)期保存卵巢，多項(xiàng)實(shí)驗(yàn)證明其正常卵泡的保存效率可達(dá)90％以上。卵巢組織的異種移植是恢復(fù)生育能力的途徑之一，但移植早期面臨缺血缺氧，可導(dǎo)致卵泡大量丟失;移植后期，因免疫排斥問題，亦可導(dǎo)致組織的壞死。間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)作為再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域內(nèi)一種有巨大潛力的細(xì)胞，具有誘導(dǎo)分化和一定的免疫調(diào)節(jié)能力。將其應(yīng)用于卵巢組織異種移植兔模型中國(guó)內(nèi)外均未見報(bào)道。因此，研究MSCs在兔體內(nèi)的走行以及對(duì)移植卵巢組織所起的作用的探索，包括局部

3、調(diào)節(jié)能力及組織再生能力，對(duì)于提高卵巢組織的移植效果具有重要的意義。
　　目的:
　　1、提高玻璃化凍存的效率，以期體外長(zhǎng)期保存女性生育功能。
　　2、研究MSCs在人卵巢組織異種移植兔模型中的走行，在移植部位中發(fā)揮的免疫調(diào)節(jié)能力及組織修復(fù)能力，提高卵巢組織的存活能力。
　　3、尋找MSCs的最佳給藥方式。
　　方法:
　　將新鮮的卵巢組織通過玻璃化凍存的方法進(jìn)行低溫保存，4周后進(jìn)行復(fù)蘇，于2小時(shí)內(nèi)進(jìn)行

4、移植。選擇20只性成熟的雌性新西蘭大白兔作為人卵巢組織異種移植的受體，經(jīng)去勢(shì)手術(shù)處理后隨機(jī)分配到4組中。經(jīng)凍存-復(fù)蘇后的人卵巢組織移植到兔背肌內(nèi)，按以下不同處理分成四組:1、MSC組:MSCs耳緣靜脈注射（1×106/kg）+等量生理鹽水肌注;2、FTY組:MSCs培養(yǎng)基耳緣靜脈注射+FTY720肌注(2mg/kg/d);3、 MFIV組:MSCs耳緣靜脈注射（1×106/kg）+FTY720肌注（2mg/kg/d）;4、MFIM組:M

5、SCs肌注(1×106/kg)+FTY720肌注(2mg/kg/d)。所有MSCs均于注射前用CM-Dil染料進(jìn)行處理。移植前3天起除MSC組外，其余三組每天使用FTY720(2mg/kg)進(jìn)行免疫抑制。所有移植物于移植后8周全部回收。移植物移植前用HE染色及電鏡評(píng)估組織的形態(tài)完整性;采用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)兔外周血E2水平及IFN-γ水平;取新鮮抗凝全血檢測(cè)兔外周血中CD4及CD8淋巴細(xì)胞的比例;8周后記錄卵巢組織回收率及觀察肉眼形態(tài);回收

6、后移植物HE染色觀察組織形態(tài)及纖維化壞死率;取移植部位及其他全身實(shí)質(zhì)器官用激光共聚焦觀察MSCs的走行情況。
　　結(jié)果:
　　1、使用卵巢組織玻璃化凍存的方法能較好的保存卵巢組織，包括卵泡、粒細(xì)胞及基質(zhì);
　　2、不同給藥方式給與的間充質(zhì)干細(xì)胞均可以在體內(nèi)游走，8周后不同部位定植細(xì)胞的數(shù)量為移植部位＞脾臟＞肺等其他實(shí)質(zhì)器官;
　　3、FTY720聯(lián)合MSCs可以更好地減輕免疫排斥反應(yīng)，維持卵巢組織分泌雌二醇，且降