人NR1a膜蛋白M3-M4環(huán)靶片段免疫小鼠腦內(nèi)反應(yīng)性觀察.pdf

1、為探討M3-M4環(huán)靶片段免疫接種策略的可行性,該實(shí)驗(yàn)采用原核重組并高效表達(dá)的M3-M4環(huán)靶片段(163aa,18.8KD)通過三種途徑(鼻腔、皮下、腹腔)免疫小鼠,用組織學(xué)和免疫組織化學(xué)染色方法進(jìn)行小鼠重要腦區(qū)形態(tài)學(xué)觀察,以評(píng)估該免疫接種的中樞神經(jīng)系統(tǒng)安全性.實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:1.雙抗體夾心ELISA測(cè)定血清細(xì)胞因子濃度.第一次加強(qiáng)免疫后1天,鼻腔免疫小鼠血清干擾素-γ(IFN-γ)、白細(xì)胞介素-4(IL-4)和IL-6較對(duì)照組升高(P<0

2、.05),皮下免疫小鼠腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和IFN-γ、IL-4和IL-6較對(duì)照組明顯升高(P<0.01).2.間接ELISA測(cè)定血清特異性抗體IgG.末次免疫后7天,鼻腔免疫小鼠血清抗體陰性,皮下及腹腔免疫小鼠血清抗體陽(yáng)性,其中皮下組約1:800,腹腔組約1:400.3.流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定鼻相關(guān)淋巴組織(NALT)、脾T淋巴細(xì)胞亞群末次免疫后7天,鼻腔免疫小鼠NALT和脾臟CD4<'+>、CD8<'+>T細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)百分比升高

3、(P<0.05、P<0.01),CD4<'+>/CD8<'+>無變化.皮下免疫小鼠脾CD4<'+>、CD8<'+>T細(xì)胞百分比升高(P<0.01),CD4<'+>/CD8<'+>降低.4.腦組織學(xué)和免疫組織化學(xué)染色末次免疫后7天取腦,各免疫組小鼠腦HE和Nissl染色顯示正常組織形態(tài),各腦區(qū)未見病理性改變和細(xì)胞脫失,c-Fos和小膠質(zhì)細(xì)胞免疫組織化學(xué)染色陰性.該實(shí)驗(yàn)證明M3-M4環(huán)重組肽經(jīng)皮下和腹腔途徑接種誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生了特異性免疫應(yīng)答,