人NMDA受體主亞基M3-M4環(huán)的原核表達(dá)、純化與鑒定.pdf

1、該課題組通過(guò)生物信息學(xué)方法對(duì)人NMDAR主亞基(NR1)上受體激活相關(guān)多肽片段的理化特性、抗原性及自身免疫原性等進(jìn)行分析之后,確定NR1膜蛋白胞外區(qū)M3-M4環(huán)靶片段更易成為NMDAR免疫干預(yù)的分子靶點(diǎn).以此為靶點(diǎn)采用免疫干預(yù)的方法來(lái)調(diào)控NMDAR的激活狀態(tài),進(jìn)而有望建立安全、可行的興奮毒性腦損害免疫防治的方法.人NR1膜蛋白M3-M4環(huán)靶片段是由163個(gè)氨基酸組成的多肽,相對(duì)分子質(zhì)量為18800,該研究采用基因工程方法獲得該肽段,以用

2、于進(jìn)一步免疫原性及相關(guān)應(yīng)用研究,為興奮性腦損害免疫干預(yù)提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ).該研究以人腦膠質(zhì)瘤組織總RNA為模板,采用RT-PCR方法擴(kuò)增出人NMDAR主亞基M3-M4環(huán)的基因片段,并成功構(gòu)建了原核表達(dá)載體pBV-NR1L3.同時(shí),按照計(jì)算機(jī)輔助原核表達(dá)載體pBV220中外源基因高效表達(dá)的數(shù)學(xué)模型預(yù)測(cè)方法,將PCR引物進(jìn)行優(yōu)化改構(gòu),從而實(shí)現(xiàn)了目的基因的高效表達(dá),并對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行了純化和鑒定.凝膠掃描分析表達(dá)量約占菌體總蛋白29﹪,蛋白純度達(dá)95