IBV M41人工感染SPF雞靶器官中固有免疫相關(guān)因子應(yīng)答的動(dòng)態(tài)觀察.pdf

1、雞傳染性支氣管炎(Infectious bronchitis，IB)是由雞傳染性支氣管炎病毒(Infectious bronchitis virus，IBV)感染引起的一種急性呼吸道傳染病，是危害養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展的重要疾病之一。IBV血清型較復(fù)雜，相互之間的交叉保護(hù)效果有限，傳統(tǒng)的IBV疫苗防控策略受到挑戰(zhàn)。因此，進(jìn)一步研究IBV致病機(jī)理和免疫機(jī)制，對(duì)于IB防控具有重大意義。
　　固有免疫（天然免疫）反應(yīng)是宿主抵御病毒感染的第一道防線，

2、是一種有效的抗病毒機(jī)制，其主要通過模式識(shí)別受體(Patternrecognition receptor, PRR)感知入侵的危險(xiǎn)信號(hào)后產(chǎn)生一系列效應(yīng)，抵抗外來病原體的入侵。分泌型免疫球蛋白A（SecretaryimmunoglobulinA，SIgA）是天然黏膜免疫中的重要因子。目前關(guān)于IBV感染對(duì)SIgA、Toll樣受體3（Toll like receptor3，TLR3）及由TLR3啟動(dòng)的信號(hào)通路中核轉(zhuǎn)錄因子κB(Nuclear f

3、actorκB，NF-κB)和干擾素調(diào)節(jié)因子7（interferon regulatory factor7，IRF-7）的影響研究比較欠缺。
　　本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)（Immunohistochemistry，IHC）技術(shù)對(duì)SPF雞人工感染IBV M41株后1、3、5、8、11、14、21和28天(dayspost infection，DPI)的氣管和腎臟中的IBV、TLR3、NF-κB和IRF-7及氣管和哈德氏腺中的SIgA進(jìn)

4、行分析，同時(shí)對(duì)感染后不同時(shí)相氣管、腎臟和哈德氏腺的組織病理學(xué)變化進(jìn)行觀察，旨在探討IBV M41毒株人工感染SPF雞后病毒在氣管、腎臟和哈德氏腺中的分布規(guī)律，及其對(duì)TLR3信號(hào)通路和黏膜SIgA的影響，揭示IBV M41感染雞的致病機(jī)理和宿主天然抗病毒的防御機(jī)制。研究結(jié)果如下:
　　1、IBV M41感染SPF雞后，氣管、腎臟和哈德氏腺出現(xiàn)不同程度的病理學(xué)變化。氣管在感染早期(1-8DPI)出現(xiàn)黏膜上皮細(xì)胞變性或壞死，黏膜下層淋巴

5、細(xì)胞浸潤(rùn)，發(fā)生氣管炎癥，IHC檢測(cè)結(jié)果表明病毒含量在此期間維持較高水平，并在5DPI達(dá)到峰值;感染中期(11-14DPI)，氣管黏膜逐漸修復(fù)，上皮細(xì)胞再生，淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)減少，病毒含量快速降低;感染后期(21-28DPI)，氣管中的病毒被清除，組織基本結(jié)構(gòu)恢復(fù)正常。腎臟組織在5DPI至11 DPI出現(xiàn)明顯的病理學(xué)變化，腎小管輕度變性或壞死，間質(zhì)有數(shù)個(gè)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，病毒含量在此期間較多，但較氣管組織少，在8DPI達(dá)到峰值;14DPI后病毒含

6、量降低并逐漸消失，組織病變逐漸減輕至結(jié)構(gòu)正常。1DPI至3DPI哈德氏腺中無病毒分布也無明顯病理學(xué)變化;5DPI至14DPI，組織細(xì)胞變性或壞死，間質(zhì)增寬，淋巴細(xì)胞增多，并檢測(cè)到少量病毒分布;21DPI后，病毒消失，組織結(jié)構(gòu)逐漸恢復(fù)。研究結(jié)果顯示氣管組織病變比腎臟和哈德氏腺嚴(yán)重，且病毒含量也明顯高于腎臟和哈德氏腺，表明IBV M41毒株對(duì)不同組織親嗜性不同，造成的病理?yè)p傷程度也不同，病理?yè)p傷程度和病毒含量存在相關(guān)性。
　　2、IH

7、C檢測(cè)結(jié)果顯示TLR3、NF-κB和IRF-7主要分布在氣管黏膜上皮細(xì)胞和腎臟腎小管上皮細(xì)胞胞漿中，部分胞核也有NF-κB和IRF-7分布。試驗(yàn)組氣管中的TLR3、NF-κB和IRF-7的表達(dá)量在3DPI至8DPI出現(xiàn)不同程度上調(diào)，分別在5DPI、5DPI和8DPI達(dá)到峰值(P＜0.01)，IRF-7在細(xì)胞核中的表達(dá)量明顯增多;11DPI至14DPI，仍有較多的TLR3表達(dá)(P＜0.05)，NF-κB和IRF-7的表達(dá)量逐漸恢復(fù)到正常水

8、平;21DPI后，TLR3表達(dá)量也恢復(fù)到正常水平;試驗(yàn)組腎臟中的TLR3和NF-κB的表達(dá)量在5DPI至11DPI出現(xiàn)不同程度上調(diào)，分別在8DPI和5DPI達(dá)到峰值(P＜0.01)，IRF-7的表達(dá)量在3DPI至5DPI略有上升，且細(xì)胞核中的表達(dá)量明顯增多;14DPI后，TLR3和NF-κB的表達(dá)量逐漸恢復(fù)到正常水平;IRF-7的表達(dá)量在8DPI恢復(fù)到正常水平，但細(xì)胞核中的表達(dá)量仍然較高，21DPI后減少。
　　3、在感染IBV

9、M41前期（1DPI至11DPI），試驗(yàn)組和對(duì)照組哈德氏腺均無SIgA陽性細(xì)胞分布。14DPI，試驗(yàn)組和對(duì)照組哈德氏腺均檢測(cè)到SIgA陽性細(xì)胞，試驗(yàn)組SIgA陽性細(xì)胞較大較圓，充滿棕紅色陽性顆粒，且局部數(shù)量增多;對(duì)照組SIgA陽性細(xì)胞較小，呈三角形、橢圓形等。21DPI至28DPI，其形態(tài)和數(shù)量與對(duì)照組相近。而整個(gè)試驗(yàn)過程中，氣管組織中均未檢測(cè)到SIgA陽性細(xì)胞分布。
　　綜上所述，IBV感染早期，SPF雞氣管出現(xiàn)明顯的病理學(xué)變化

10、，病毒含量從1DPI開始上升，在3DPI至8DPI維持較高水平，并在5DPI達(dá)到峰值;在此期間，氣管中TLR3、NF-κB和IRF-7的表達(dá)量均有不同程度上升，其中TLR3上升最明顯且持續(xù)時(shí)間最長(zhǎng)，與對(duì)照組相比，從3DPI至14DPI，其陽性表達(dá)量差異顯著;NF-κB和IRF-7出現(xiàn)變化的時(shí)間分別在3DPI-8DPI和5DPI-8DPI，且兩者在細(xì)胞核中的表達(dá)量均增多，其中IRF-7最明顯。IBV感染后期，氣管組織結(jié)構(gòu)恢復(fù)正常，病毒含量

11、迅速下降并逐漸消失，TLR3、NF-κB和IRF-7的表達(dá)量恢復(fù)到正常水平。IBV M41感染后腎臟組織出現(xiàn)輕度的病理學(xué)變化且出現(xiàn)病變的時(shí)間較遲，病變發(fā)生于5DPI-14DPI;其病毒含量和TLR3、NF-κB及IRF-7的表達(dá)量變化規(guī)律與氣管基本一致，但變化不如氣管明顯，且持續(xù)時(shí)間較氣管短，病毒含量較高時(shí)間點(diǎn)和TLR3、NF-κB及IRF-7表達(dá)量變化時(shí)間基本是在5DPI-8DPI左右。哈德氏腺中的SIgA陽性細(xì)胞在IBV M41感染