CaMKⅡ-PKA途徑在慢性心衰模型觸發(fā)性心律失常產(chǎn)生中的作用.pdf

1、背景：鈣調(diào)蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）和蛋白激酶A（PKA）作為β腎上腺素受體下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，能磷酸化心肌細胞內(nèi)多種鈣調(diào)節(jié)蛋白，在心肌細胞內(nèi)鈣穩(wěn)態(tài)調(diào)控中起著非常重要的作用。近年來在轉(zhuǎn)基因動物和正常動物上的研究發(fā)現(xiàn)，與PKA途徑相比較，CaMKⅡ信號途徑可能是β腎上腺素誘導(dǎo)的舒張期鈣離子滲漏所導(dǎo)致的觸發(fā)活動中的主要信號途徑。但PKA和CaMKⅡ在蘭尼丁受體（RyR2）功能紊亂所致的舒張期鈣離子滲漏的作用仍然存在很大爭議，其所導(dǎo)致的直接電生理

2、特性仍然不清楚。
　　 目的：研究異丙腎上腺素和高頻率刺激對心衰心肌細胞DADs產(chǎn)生的影響以及CaMKⅡ的特異抑制劑KN93和PKA特異抑制劑H89在DADs產(chǎn)生中的作用。
　　 方法：制備家兔慢性心衰模型，心臟超聲測定LVEF<44％，酶解法分離單個心室肌細胞，應(yīng)用全細胞膜片鉗技術(shù)記錄單細胞動作電位（AP），用含1μmol/L 異丙腎上腺素的正鈣臺氏液灌流心室肌細胞，在1-3Hz電刺激下，觀察心肌細胞50％動作電位時程

3、(APD50％)和90％動作電位時程(APD90％)，并誘發(fā)DADs。在此基礎(chǔ)上分別用KN93（1μmol/L）和H89（1μmol/L）進行灌流，觀察KN93和H89對DADs發(fā)生率、DADs的幅值、聯(lián)律間期和發(fā)生個數(shù)的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1.CHF組心肌細胞的APD90和APD50較Ctl組延長（P<0.05），CHF+ISO組的APD90和APD50較CHF組縮短（P<0.05）。
　　 2.給予細

4、胞1Hz刺激，Ctl組、Ctl+ISO組、CHF組、CHF+ISO組的DADs發(fā)生率分別為15％(3/20)、45％(9/20)、26.7％(12/45)、92.3％(36/39)。Ctl+ISO組DADs發(fā)生率較Ctl組明顯增加(P<0.05)，CHF+ISO組的DADs發(fā)生率較CHF組明顯增加(P<0.05)，CHF組DADs發(fā)生率較Ctl組無明顯差別(P>0.05)，CHF+ISO組的DADs發(fā)生率較Ctl+ISO組明顯增加(P<

5、0.05)。
　　 3.給予CHF組心肌細胞1-3Hz刺激，心肌細胞DADs的發(fā)生率分別為26.7％(12/45)、76.2％(32/42)、83.9％(26/31)。2Hz組與1Hz組比較DADs發(fā)生率明顯增高(P<0.05)；2Hz組與3Hz組比較DADs發(fā)生率無明顯差別(P>0.05)。
　　 4.在灌流1μmol/L異丙腎上腺素的臺氏液，采用1Hz電刺激誘發(fā)DADs的基礎(chǔ)上，記錄KN93組的DADs誘發(fā)率為50％

6、(7/14)，KN93對DADs的抑制率為50％，KN93組DADs發(fā)生率較加藥前明顯降低(P<0.05)；再給予2Hz的刺激，記錄DADs的幅度、聯(lián)律間期和個數(shù)，可觀察到KN93可明顯降低DADs幅度(5.83 1.90 Vs 1.82 0.78,P<0.05)，延長聯(lián)律間期(250.44 108.36 Vs 524.62 390.91,P<0.05)和減少DADs的誘發(fā)個數(shù)(4.95 0.95 Vs 2.42 0.90,P<0.05

7、)。
　　 5.在灌流1μmol/L異丙腎上腺素的臺氏液，采用1Hz電刺激誘發(fā)DADs的基礎(chǔ)上，記錄H89組的DADs誘發(fā)率為15.4％(2/13)，H89對DADs的抑制率為84.6％，H89組DADs發(fā)生率較加藥前明顯降低(P<0.05)；再給予2Hz的刺激，記錄DADs的幅度、聯(lián)律間期和個數(shù)，可觀察到KN93可明顯降低DADs幅度(5.83 1.90 Vs 1.65 0.77,P<0.05)，延長聯(lián)律間期(250.44 1

8、08.36 Vs 837.48 313.53,P<0.05)和減少DADs的誘發(fā)個數(shù)(4.95 0.95 Vs 1.83 0.94,P<0.05)。
　　 6.在灌流1μmol/L異丙腎上腺素的臺氏液，采用1Hz電刺激誘發(fā)DADs的基礎(chǔ)上，記錄KN93和H89對DADs的抑制率分別為50％和84.6％，經(jīng)檢驗KN93組和H89組比較二者對DADs的抑制率無明顯差別(P>0.05)。
　　 結(jié)論：慢性心衰心肌細胞APD延長