Ryanodine受體在觸發(fā)性室性心律失常發(fā)生中的作用.pdf

1、目的：惡性心律失常長期嚴重威脅人類的健康和生命,鈣穩(wěn)態(tài)失衡是病理心肌發(fā)生觸發(fā)性室性心律失常的重要機制。Ryanodine受體是調(diào)控胞內(nèi)鈣水平的關鍵蛋白,其功能受到鈣調(diào)蛋白激酶Ⅱ的磷酸化調(diào)節(jié)。本研究在組織水平和細胞水平兩個層面,分別對兩種病理心肌模型——兔兒茶酚胺敏感性室速(CPVT)模型和心肌肥厚模型進行研究,觀察分別應用KN-93(鈣調(diào)蛋白激酶Ⅱ抑制劑)和蘭尼堿(Ryanodine受體阻斷劑)進行干預對上述模型心律失常發(fā)生的影響,并結

2、合分子生物學檢測結果,探明Ryanodine受體在病理心肌觸發(fā)性室性心律失常發(fā)生中的作用,探討阻斷Ryanodine受體對心律失常的治療價值。
　　方法：研究內(nèi)容共分三個部分,具體如下:
　　(1)KN-93、蘭尼堿對兔CPVT模型左室心肌塊心律失常發(fā)生的影響:
　　將日本長耳兔隨機分為4組:正常對照組、模型組、KN-93組和蘭尼堿組。制備兔左室楔形心肌塊的灌流模型,同步記錄心內(nèi)、外膜動作電位及跨壁心電圖。正常組灌流臺

3、氏液,模型組灌流咖啡因和異丙腎上腺素建立CPVT模型, KN-93組和蘭尼堿組預先給予各自藥物預灌,然后灌流咖啡因和異丙腎上腺素,觀察在快頻率程序刺激下各組觸發(fā)活動和室性心動過速的發(fā)生率。
　　(2)KN-93、蘭尼堿對兔心肌肥厚模型左室心肌塊心律失常發(fā)生的影響:
　　將日本長耳兔隨機分為4組:假手術組(Sham組)、心肌肥厚組(LVH組)、心肌肥厚+KN-93組(KN-93組)和心肌肥厚+蘭尼堿組(蘭尼堿組)。LVH組、K

4、N-93組和蘭尼堿組均通過縮窄腹主動脈建立兔心肌肥厚模型,Sham組僅游離腹主動脈不進行縮窄。8周后應用超聲心動圖證實心肌肥厚形成,制備兔左室楔形心肌塊的灌流模型。KN-93組和蘭尼堿組預先給予各自藥物預灌,然后觀察各組在異丙腎上腺素灌流和快頻率程序刺激下觸發(fā)活動和室性心動過速的發(fā)生率。灌流完畢后取左室心肌組織,應用Western Blot檢測各組心肌Ryanodine受體總量及Ser2815位點磷酸化蛋白水平。
　　(3)KN-

5、93、蘭尼堿對兔心肌肥厚模型左室單個心肌細胞觸發(fā)活動的影響:
　　將日本長耳兔通過縮窄腹主動脈建立心肌肥厚模型,設立假手術組作為對照。8周后應用超聲心動圖證實心肌肥厚形成,采用酶解法分離左室心肌細胞,應用全細胞膜片鉗技術記錄動作電位,觀察在異丙腎上腺素灌流和快頻率電刺激條件下,單個心肌細胞晚期后除極(DAD)和觸發(fā)活動的發(fā)生率,以及預先分別灌流KN-93和蘭尼堿對肥厚心肌細胞DAD和觸發(fā)活動發(fā)生率的影響。
　　結果：(1)在

6、兔CPVT模型左室心肌塊灌流實驗中:對照組、模型組、KN-93和蘭尼堿組觸發(fā)活動的發(fā)生率分別為0/10、10/10、4/10和2/10,多形性室速或室顫的發(fā)生率分別為0/10、9/10、2/10、1/10,KN-93組和蘭尼堿組均較模型組顯著降低(P<0.05)。
　　(2)在兔心肌肥厚模型左室心肌塊灌流實驗中:Sham組、LVH組、KN-93組和蘭尼堿組觸發(fā)活動的發(fā)生率分別為0/10、10/10、4/10、2/10,室性心動過速

7、或室顫的發(fā)生率分別為0/10、9/10、3/10、1/10,KN-93組和蘭尼堿組均較LVH組顯著降低(P<0.05);LVH組Ryanodine受體總量及Ser2815位點磷酸化蛋白水平較Sham組增加(P<0.05),LVH組、KN-93組和蘭尼堿組Ryanodine受體總量無明顯差異,但KN-93組Ser2815位點磷酸化蛋白水平較LVH組減少(P<0.05)。
　　(3)在兔心肌肥厚模型左室單個細胞灌流實驗中:Sham組、

8、LVH組、KN-93組和蘭尼堿組晚期后除極(DAD)的發(fā)生率分別為0/20、17/20、7/20和4/20,觸發(fā)活動的發(fā)生率分別為0/20、12/20、4/20和2/20,KN-93組和蘭尼堿組均較LVH組顯著降低(P<0.05)。
　　結論：降低Ryanodine受體Ser2815位點的磷酸化水平或直接阻斷Ryanodine受體,均能有效抑制病理心肌的觸發(fā)性心律失常;Ryanodine受體在觸發(fā)性心律失常發(fā)生中起重要作用,有望成