復(fù)方羊藿三七片主成分腸吸收動力學(xué)研究.pdf

1、藥物劑型是藥物使用的必備形式。藥物劑型設(shè)計(jì)合理與否直接影響到臨床藥效的發(fā)揮。中藥復(fù)方是中醫(yī)藥用藥之一大特色，其主要給藥方式—口服給藥必須經(jīng)過胃腸吸收才能發(fā)揮全身作用。中藥復(fù)方劑型設(shè)計(jì)多依據(jù)于臨床用藥需求以及病人的依從性、藥物的理化性質(zhì)，很少有從藥物腸吸收特性角度設(shè)計(jì)中藥復(fù)方劑型。本研究以復(fù)方羊藿三七片為模型藥物，利用大鼠在體腸灌注模型和Caco-2細(xì)胞模型對其主成分腸吸收動力學(xué)進(jìn)行研究，提供中藥體內(nèi)過程的參數(shù)，為進(jìn)一步開發(fā)中藥新劑型、研

2、制高質(zhì)量的中藥新制劑提供依據(jù)。 1、本論文首先制備了模型藥物，并對模型藥物進(jìn)行質(zhì)量控制。復(fù)方羊藿三七片由淫羊藿和三七組成。以淫羊藿中5種黃酮類成分和三七中3種皂苷類成分為指標(biāo)，采用HPLC-DAD-ELSD的方法對受試藥物進(jìn)行質(zhì)量控制，保證受試藥物含量的穩(wěn)定性。以淫羊藿苷計(jì)，每101.3mg淫羊藿提取物，112.0mg復(fù)方羊藿三七提取物中則含淫羊藿苷3.38mg，而112.0mg復(fù)方羊藿三七提取物中所含有的三七中三種皂苷類成分的

3、量則與16.90mg三七提取物相當(dāng)。即淫羊藿苷、三七提取物、朝鮮淫羊藿提取物、復(fù)方羊藿三七提取物的用量比為3.38：16.90：101.3：112.0。 2、建立了大鼠在體腸灌注模型，首次對中藥復(fù)方羊藿三七片主成分的腸吸收動力學(xué)進(jìn)行研究。 (1)化合物的穩(wěn)定是藥物研究的必要性。為了保證Caco-2細(xì)胞模型實(shí)驗(yàn)及大鼠腸灌注實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確可靠，首先對化合物的化學(xué)穩(wěn)定性進(jìn)行了考察。采用恒溫法，以pH值為5.5～8.0的Hank's

4、平衡鹽溶液(HBSS)作為溶解介質(zhì)，在37℃±0.5℃條件下考察幾種受試化合物在12小時(shí)內(nèi)的穩(wěn)定性。計(jì)算反應(yīng)降解常數(shù)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明所考察的淫羊藿苷，朝鮮淫羊藿提取物中淫羊藿苷，復(fù)方羊藿三七提取物中淫羊藿苷，三七提取物中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rbl在pH值為5.5～8.0的HBSS中均比較穩(wěn)定，可以進(jìn)行相應(yīng)的在體離體實(shí)驗(yàn)。 (2)對大鼠在體腸灌流樣品的分析方法學(xué)進(jìn)行了研究。建立了淫羊藿苷、三七皂苷R1、人參皂苷Rg

5、1、人參皂苷Rbl大鼠在體腸灌注樣品的HPLC測定方法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，淫羊藿苷、三七皂苷R1，人參皂苷Rg1，人參皂苷Rb1線性好，精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、回收率符合要求，所建方法可行。 (3)應(yīng)用大鼠在體腸灌注模型分別研究了單體淫羊藿苷、淫羊藿藥材中淫羊藿苷、復(fù)方中淫羊藿苷、三七中三種皂苷類成分的腸吸收動力學(xué)。結(jié)果表明單體淫羊藿苷十二指腸和空腸具有遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于吸收較好的普萘洛爾(P*eft＞3.5)的表觀滲透系數(shù)是因?yàn)橐蜣杰赵谀c

6、內(nèi)被快速代謝成兩種代謝產(chǎn)物。淫羊藿中及復(fù)方羊藿三七中淫羊藿苷在各腸段的表觀滲透系數(shù)和消除百分率較淫羊藿苷單體的低。淫羊藿藥材中淫羊藿苷和復(fù)方羊藿三七中淫羊藿苷的表觀滲透系數(shù)及消除百分率與單體淫羊藿苷有顯著性差異，而淫羊藿藥材中淫羊藿苷與復(fù)方羊藿三七中淫羊藿苷就各腸段的表觀滲透系數(shù)和消除百分率并沒有顯著性差異?？偟膩碚f，復(fù)方羊藿三七中淫羊藿苷會因淫羊藿中其他黃酮苷類成分競爭LPH酶的水解作用而使淫羊藿苷水解受到抑制，但其在腸段表現(xiàn)出的表觀

7、滲透系數(shù)和消除百分率主要還是因?yàn)槊傅乃庾饔谩?3、建立了Caco-2細(xì)胞培養(yǎng)模型，首次應(yīng)用此模型對復(fù)方羊藿三七片中主成分的吸收轉(zhuǎn)運(yùn)情況。 20μM淫羊藿苷的表觀滲透系數(shù)為(0.62±0.032)×10-6cm·s-1，淫羊藿苷的表觀滲透系數(shù)值不大，其腸吸收不是很好。而且試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)淫羊藿苷B到A側(cè)的滲透系數(shù)遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于A到B側(cè)的滲透系數(shù)(20μM，4.83倍)，提示淫羊藿苷在小腸吸收轉(zhuǎn)運(yùn)的過程中可能會小腸上皮細(xì)胞所含的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白

8、外排。淫羊藿苷單體吸收機(jī)制研究表明淫羊藿苷可能存在P-gp轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的外排作用。淫羊藿藥材中淫羊藿苷或者復(fù)方羊藿三七中淫羊藿苷AP-BL側(cè)及BL-AP側(cè)的滲透系數(shù)較淫羊藿苷單體時(shí)的滲透系數(shù)小，外排作用減弱，透膜性也降低。 綜上，復(fù)方羊藿三七片中黃酮苷類成分淫羊藿苷在腸道會受到LPH酶的水解作用和P-gp轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的外排作用，吸收不好。同時(shí)，復(fù)方中另一類主要成分一三七中的皂苷類成分的吸收也較差。因此，必須通過現(xiàn)代劑型設(shè)計(jì)方法減少復(fù)方羊