復(fù)方烏梅藥代動力學(xué)及藥效學(xué)研究.pdf

1、復(fù)方烏梅是一種防治水產(chǎn)動物細(xì)菌性疾病的漁用中藥復(fù)方，主味藥是烏梅。復(fù)方中含有有蘋果酸、檸檬酸、沒食子酸和黃酮類等成分，具有抗菌、解毒、收斂止血和祛腐生新的作用。目前，中藥復(fù)方已廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)動物病害的防治，但關(guān)于中藥復(fù)方在水產(chǎn)動物體內(nèi)的藥物代謝過程及其藥效作用機(jī)理研究尚不明確，因此，對于復(fù)方的代謝規(guī)律，作用機(jī)理研究尤其重要。 復(fù)方烏梅為體外抑菌效果較強(qiáng)的中藥組方。本試驗(yàn)通過復(fù)方烏梅超聲提取方法及高效液相有效成分含量測定的方法，獲

2、得了復(fù)方烏梅的最佳提取工藝及同時測定復(fù)方烏梅中四種有效成分的含量的高效液相色譜法；通過測定攻毒給藥后鯽魚體內(nèi)血液生理生化指標(biāo)的測定，分析了復(fù)方烏梅對鯽魚肝功能及抗氧化機(jī)能的影響，研究了復(fù)方烏梅在鯽魚體內(nèi)的藥物代謝過程，及口服藥物生物利用度，為認(rèn)識復(fù)方烏梅的代謝規(guī)律、在機(jī)體內(nèi)的作用機(jī)理，給藥途徑及劑量提供了寶貴的參考數(shù)據(jù)。 1、復(fù)方烏梅的藥代動力學(xué)研究 1.1復(fù)方烏梅超聲提取法的工藝研究 采用L9(33)正交試驗(yàn)，

3、以總有機(jī)酸、總黃酮為檢測指標(biāo)，建立了復(fù)方烏梅超聲提取的最佳工藝條件。復(fù)方烏梅的最佳提取條件為A2B2C2，即在60℃下加20倍量的水提取3次，每次提取時間為20分鐘。試驗(yàn)測得復(fù)方烏梅總有機(jī)酸與總黃酮含量分別為19.14％和27.56‰。 1.2 HPLC測定復(fù)方烏梅有效成份含量測定 采用HPLC法，以磷酸水溶液(pH 2.55)與乙腈為流動相，采用線性梯度洗脫，0～20 min，5％～15％，檢測波長215nm；20～6

4、0 min，15％～45％，檢測波長280mim：流速為0.6mL/min的色譜條件下各種有效成分不僅能較好的分離，且峰形較好。結(jié)果顯示：復(fù)方烏梅中的蘋果酸含量為31.93‰，檸檬酸含量為86.39‰，沒食子酸含量為6.60‰，黃芩苷的含量為7.61‰。首次建立了同時測定復(fù)方烏梅中四種有效成分含量的方法，為復(fù)方烏梅質(zhì)量控制及其作用機(jī)理的研究提供了寶貴的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。試驗(yàn)證實(shí)，該法快速簡便，穩(wěn)定可靠，專屬性強(qiáng)。 1.3復(fù)方烏梅在鯽魚

5、體內(nèi)的藥代動力學(xué)研究 通過對鯽魚口灌與注射給藥，以沒食子酸為目標(biāo)藥物，運(yùn)用高效液相色譜法(HPLC)檢測復(fù)方烏梅在鯽魚血液及肝腎組織中的濃度變化，獲得了鯽魚對復(fù)方烏梅的吸收、分布與消除數(shù)據(jù)。結(jié)果表明，復(fù)方烏梅在魚體血液內(nèi)的藥時數(shù)據(jù)符合開放式一室模型，口灌，靜脈注射給藥后血液藥物代謝動力學(xué)方程分別為C=15.1413e-0.0744t，C=21.82446e-0.1732t?？诠嘟M吸收半衰期t1/2Ka與消除半衰期t1/2Ka分別

6、為0.637h，4.001h，最大血藥濃度Cmax分別為12.956μg/ml,；注射組消除半衰期t1/2Ke為9.311h，最大血藥濃度Cmax12.956μg/mL，22.200μg/mL；藥時曲線下面積AIJCo‐∞別為105.915mg/L*h，203.395mg/L*h?？诜?fù)方烏梅沒食子酸在體內(nèi)的絕對生物利用度F=52.074％?？诠嘟M復(fù)方烏梅在肝腎內(nèi)的藥時數(shù)據(jù)符合二室模型，藥代動力學(xué)方程分別為C=15.9057e-0.29

7、94t+2.4192e-0.0214t，C=13.334e-0.2676t+3.6237e-0.0078t。最大藥物濃度Cmax分別為15.222μg/g，16.38μg/g。肝腎消除半衰期t1/2Ke。分別為32.44Oh及99.801.h。 2、復(fù)方烏梅藥效學(xué)研究 2.1復(fù)方烏梅的體外抑菌效果及急性毒性試驗(yàn) 采用藥敏試驗(yàn)，進(jìn)行了復(fù)方烏梅體外抑菌試驗(yàn)，采用試管兩倍稀釋法，測定了復(fù)方烏梅超聲提取液對魚類細(xì)菌性疾病

8、三種常見致病菌的最小抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)，及對鯽魚的急性毒性試驗(yàn)。結(jié)果表明，復(fù)方烏梅超聲提取液對溫和氣單胞菌(Aeromonas sobria)、遲緩愛德華菌(Edwardsieda torda)和魯克耶爾森氏菌(Yersina nuckeri j)的最小抑菌濃度分別為3.125m/ml、0.781mg/ml、0.781mg/ml，最小殺菌濃度分別為12.500mmg/ml、3.125mg/ml、1.563mg/m

9、l；復(fù)方烏梅對鯽魚的48 h半致死濃度為625mg/kg,安全濃度為62.5mg/kg。 2.2復(fù)方烏梅藥效學(xué)研究 采用人工體內(nèi)攻毒的方法，通過測定鯽魚生理生化指標(biāo)、抗氧化指標(biāo)、攻毒死亡率及藥物保護(hù)率，反應(yīng)復(fù)方烏梅在鯽魚體內(nèi)的防治效果。結(jié)果表明，復(fù)方烏梅能有效的降低血液中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和總膽紅素含量，有保護(hù)肝細(xì)胞，增強(qiáng)肝功能恢復(fù)作用；能有效的清除體內(nèi)自由基，增加超氧化物歧化酶活力，保護(hù)細(xì)胞免受