滑膜肉瘤上皮間葉不同組織成分中EMT相關(guān)基因的表達(dá)與意義.pdf

1、目的：滑膜肉瘤（SS）是間葉來源惡性腫瘤中病理形態(tài)和免疫組化同時表達(dá)上皮、間葉表型的最經(jīng)典模型。本實驗通過檢測兩種細(xì)胞成分之間上皮間葉轉(zhuǎn)化或間葉上皮轉(zhuǎn)化（EMT/MET）相關(guān)基因mRNA表達(dá)的差異，探討激光捕獲顯微切割（LCM）和組織小芯片法兩種分離方法在石蠟包埋福爾馬林固定（FFPE）的 SS組織中應(yīng)用的可行性，分析兩種分離方法在石蠟包埋組織中的應(yīng)用范圍及優(yōu)缺點，為進(jìn)一步深入研究SS雙相分化的機(jī)制提供有力技術(shù)支持。
　　方法：選

2、取經(jīng)病理組織學(xué)觀察和免疫組織化學(xué)證實的FFPE滑膜肉瘤樣本12例（雙相型10例，單相纖維型2例），其中包括2例復(fù)發(fā)病例。應(yīng)用ArcturusXT?系統(tǒng)LCM和組織小芯片法分離、純化SS梭形細(xì)胞和上皮細(xì)胞，采用Trizol法提取RNA，運(yùn)用熒光實時定量PCR檢測EMT相關(guān)基因（E-cadherin、N-cadherin、Snail和Slug）在SS上皮細(xì)胞和梭形細(xì)胞中mRNA的表達(dá)，通過SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，采用獨(dú)立樣本及對

3、照樣本的T檢驗。
　　結(jié)果：（1）ArcturusXT?系統(tǒng)LCM收集約2×104個SS細(xì)胞后，可用于qRT-PCR，成功率75％（3/4）。（2）組織小芯片法分離FFPE SS組織，提取RNA的成功率為72.2%（13/18）。（3）11例梭形細(xì)胞RNA樣本中，E-cadherin mRNA表達(dá)明顯高于N-cadherin（2-△Ct平均值分別為3.2116，2.9253）；Snail mRNA表達(dá)明顯高于Slug（2-△Ct平

4、均值分別為22.5389，0.4985）；5例上皮樣細(xì)胞樣本中，E-cadherin mRNA表達(dá)略高于N-cadherin（2-△Ct平均值分別為2.9253，2.5628）；Snail顯著高于Slug（2-△Ct平均值分別為8.54316，0.4089）；其中僅Snail的mRNA表達(dá)梭形區(qū)明顯高于上皮區(qū)（P=0.001）。（4）兩例復(fù)發(fā)病例中，原發(fā)組織的梭形區(qū)細(xì)胞中 E-cadherin、N-cadherin、Snail、Slug