2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、近年來,獸藥殘留的危害已成為一個(gè)世界范圍內(nèi)被高度關(guān)注的問題,因此,藥殘檢測(cè)方法的建立也就成了研究的熱點(diǎn)。但是現(xiàn)有的檢測(cè)方法多數(shù)存在著價(jià)格昂貴、操作繁瑣、靈敏度不高等問題。本研究以人工灌服小鼠喹乙醇為模型,利用差異顯示反轉(zhuǎn)錄PCR(DDRRT-PCR)技術(shù)尋找在灌服前后小鼠不同組織中差異表達(dá)的基因,試圖建立喹乙醇?xì)埩襞c基因表達(dá)之間的特異性關(guān)系,為建立分子生物學(xué)檢測(cè)手段奠定基礎(chǔ)。 首先提取健康昆明白雌性小鼠的肝臟、腎臟、卵巢,雄性小

2、鼠睪丸總RNA,利用設(shè)計(jì)合成的3’端錨定引物進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄合成cDNA第1鏈,然后再利用5’端隨機(jī)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序膠SDS-PAGE,確定各項(xiàng)技術(shù)參數(shù),建立DDRT-PCR檢測(cè)技術(shù)。 選取昆明白小鼠60只,雌雄各半,在普通條件下飼養(yǎng)。將雌性和雄性鼠分別隨機(jī)分為2組,共4組。將雌鼠和雄鼠各取1組為實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行灌服25mg/ml喹乙醇,每只35μl,另一組為對(duì)照組,灌胃同樣劑量的水,每天1次,連續(xù)灌服5天。同時(shí)取實(shí)驗(yàn)

3、組和對(duì)照組雌小鼠的肝、腎、卵巢,雄小鼠的睪丸,利用上述已建立的DDRT-PCR檢測(cè)技術(shù)尋找不同組織中差異表達(dá)的基因。分別在肝中發(fā)現(xiàn)8條差異基因,在腎中發(fā)現(xiàn)4條,在卵巢中發(fā)現(xiàn)1條,在睪丸中發(fā)現(xiàn)2條,共發(fā)現(xiàn)15條差異基因。對(duì)這些基因進(jìn)行二次PCR擴(kuò)增后進(jìn)行序列測(cè)定,并與GenBank中小鼠的基因組基因或cDNA進(jìn)行比對(duì),結(jié)果發(fā)現(xiàn)在腎中差異表達(dá)的基因有3條為cDNA,分別命名為F1、F2、F3。根據(jù)F1、F2、F3的序列測(cè)定結(jié)果設(shè)計(jì)特異性引物

4、,對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組小鼠的腎臟總RNA進(jìn)行特異性RF-PCR擴(kuò)增,結(jié)果表明,這三條基因在實(shí)驗(yàn)組中的表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組。 對(duì)F1、F2、F3進(jìn)行功能性分析,發(fā)現(xiàn)F1與蛋白磷酸酶1B基因同源性為100%。蛋白磷酸酶是一大類控制人體蛋白質(zhì)去磷酸化的關(guān)鍵酶,在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中起關(guān)鍵調(diào)節(jié)作用;F2與CCCH鋅指型結(jié)構(gòu)包含3個(gè)半胱氨酸、8個(gè)組氨酸(zc3h8)同源性為99%,鋅指是一種常出現(xiàn)在DNA結(jié)合蛋白中的一種結(jié)構(gòu)基元,具有鋅指結(jié)構(gòu)的蛋

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