瘦素(Leptin)基因在山羊不同組織中的表達(dá)及在乳腺發(fā)育不同時(shí)期的甲基化分析.pdf

1、為了研究Leptin基因的表達(dá)對(duì)山羊乳腺發(fā)育的影響，以及Leptin基因的甲基化與基因表達(dá)的關(guān)系，本實(shí)驗(yàn)采用定量PCR方法對(duì)不同時(shí)期文登奶山羊、嶗山奶山羊、波爾山羊乳腺組織中Leptin基因的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，并利用亞硫酸鹽測(cè)序法，分析了相應(yīng)時(shí)期Leptin基因的甲基化水平，目的是要發(fā)現(xiàn)青春期中期、妊娠中期、泌乳期和退化期，文登奶山羊、嶗山奶山羊和波爾山羊乳腺組織中Leptin基因的表達(dá)以及甲基化的變化規(guī)律，揭示Leptin基因在三個(gè)不同品

2、種山羊不同發(fā)育時(shí)期乳腺組織中的甲基化與基因表達(dá)的關(guān)系。
　　 因?yàn)槭菟卦趧?dòng)物體的幾乎各個(gè)器官都表達(dá)，分析測(cè)定Leptin的分布和含量等信息對(duì)了解Leptin的作用至關(guān)重要，可以為深入研究Leptin的生物學(xué)作用及其機(jī)制提供參考。
　　 根據(jù)山羊乳腺發(fā)育特點(diǎn)，我們分別以青春期中期、妊娠期中期、泌乳中期和退化期四個(gè)時(shí)期為采樣時(shí)間點(diǎn)。分別以4個(gè)時(shí)期文登奶山羊、嶗山奶山羊、波爾山羊乳腺組織的cDNA為模板，以β-actin為內(nèi)參

3、基因，每一組織設(shè)3個(gè)重復(fù)，進(jìn)行定量PCR擴(kuò)增，檢測(cè)Leptin基因的表達(dá)情況。Leptin基因的定量結(jié)果顯示，三個(gè)品種的山羊在青春期中期和退化期Leptin的表達(dá)量比較高，妊娠中期和泌乳期表達(dá)量差不多都明顯低于青春期中期和退化期，并且相同品種山羊在乳腺發(fā)育的青春期和退化期與妊娠期和泌乳期比較差異情況均顯著(p＜0.05).
　　 從總體趨勢(shì)上看，瘦素基因Leptin在相同的時(shí)期不同品種間表達(dá)差異情況大體一致，在每個(gè)時(shí)期瘦素基因的

4、表達(dá)量總是:文登奶山羊＞嶗山奶山羊＞波爾山羊，且除了在泌乳期文登奶山羊與嶗山奶山羊差異不顯著(p=0.0675＞0.05)以外別的時(shí)期差異均顯著(p＜0.05)。
　　 為了分析檢測(cè)Leptin基因的甲基化情況，分別取文登奶山羊、嶗山奶山羊和波爾山羊4個(gè)時(shí)期的乳腺組織為試驗(yàn)點(diǎn)，采用亞硫酸鹽對(duì)樣本DNA進(jìn)行處理，測(cè)序分析Leptin基因的甲基化水平。文登奶山羊在青春期中期、妊娠中期、泌乳中期、退化期甲基化的CpG位點(diǎn)的數(shù)目分別為5

5、5、58、58、60;甲基化比率分別78.57％，82.86％，82.86％，85.71％;嶗山奶山羊在各個(gè)時(shí)期甲基化的CpG位點(diǎn)數(shù)目分別為59、61、58、60;甲基化比率分別為84.29％，87.14％，82.86％，85.71％。波爾山羊在各個(gè)時(shí)期的甲基化CpG位點(diǎn)數(shù)目分別為:61、60、61、59，甲基化比率為:87.14％，85.71％，87.14％，84.29％。統(tǒng)計(jì)后發(fā)現(xiàn)，三種山羊在乳腺發(fā)育的不同四個(gè)時(shí)期5'UTRCG位點(diǎn)

6、差不多均被甲基化，而且比率在78％-88％之間。三種山羊無(wú)論是在同一時(shí)期不同品種之間還是同一品種不同發(fā)育時(shí)期均無(wú)規(guī)律性可循。同一品種不同時(shí)期間的Leptin基因的甲基化水平不存在差異(p＞0.05);在同一時(shí)期不同品種山羊間同樣也不存在差異(p＞0.05)。綜合瘦素在乳腺中的定量表達(dá)情況，我們可以認(rèn)為這三個(gè)品種山羊的Leptin基因的甲基化與其表達(dá)均無(wú)直接關(guān)系。
　　 利用Real-timePCR技術(shù)，對(duì)瘦素在嶗山奶山羊16種不