蘚類植物回心草的化學(xué)成分和生物活性研究.pdf

1、蘚類植物是生物多樣性的重要組成成分，雖然未正式成為藥用植物，但早在16世紀(jì)就有用蘚類植物如真蘚屬、澤蘚屬治療創(chuàng)傷的記錄[1]。蘚類植物雖然分布面積較廣，但密度較小，種間雜生，不易區(qū)別和分離，難以大量采集，對其進(jìn)行化學(xué)成分的研究長期受到忽視，隨著分析技術(shù)不斷進(jìn)步，蘚類植物化學(xué)成分的研究才取得一定進(jìn)展。 本文研究的回心草為真蘚科植物紅大葉蘚Rhodobryumroseum(Hedw)Limpr的干燥全草[2]《云南中草藥選》中記載其

2、能“性平微苦，具有消炎，鎮(zhèn)靜，壯陽等性能，全株入藥，主治心臟病，神經(jīng)衰弱，陽萎等癥”[3]。廣泛分布在我國的華東、華北、東北、西南等地區(qū)，云南省為主產(chǎn)地。我們曾報(bào)道從中發(fā)現(xiàn)了生物堿、三萜類等化合物[4]，本文繼續(xù)對紅大葉蘚中的其它化學(xué)成分、藥理作用及其作用機(jī)制進(jìn)行研究。 從紅大葉蘚R.roseum(Hedw)Limpr的乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物部分和水部分共分離得到26個化合物，運(yùn)用多種現(xiàn)代波譜技術(shù)鑒定了其中23個化合物的化學(xué)

3、結(jié)構(gòu)和立體構(gòu)型。這些化合物包括5個五環(huán)三萜類化合物：齊墩果酸(oleanolicacid)(1)，2α-羥基齊墩果(2α-hydroxyoleanolicacid)(2)，烏蘇酸(ursolicacid)(3)，2α-羥基烏蘇酸(2α-hydroxyursolicacid)(4)，木栓酮(friedelin)(5)；1個貝殼杉烷型二萜苷類化合物：甜菊苷(stevioside)(6)；2個黃酮類化合物：芹菜素(apigenin)(7)，槲

4、皮素(quercetin)(8)；4個酚酸類化合物：咖啡酸(caffeicacid)(9)，原兒茶酸(protocatechuicacid)(10)，對羥基苯甲酸(p-hydroxybenzoicacid)(11)，對羥基桂皮酸(p-hydroxycinnamicacid)(12)；6個直鏈脂肪酸：棕櫚酸(palmicacid)(13)，正二十六碳酸(n-hexacosanoicacid)(14)，正二十八碳酸(n-octacosano

5、icacid)(15)，正三十碳酸(n-triacontanoicacid)(16)，琥珀酸(succinicacid)(17)，己二酸(adipicacid)(18)；1個生物堿類化合物：尿囊素(allantoin)(19)；1個聯(lián)苯類化合物：3，5，3'，5'-四甲氧基-4,4'-聯(lián)苯二酚(3，5，3'，5'-tetramethoxy-4,4'-diphenol)(20)；1個糖類化合物：果糖(fructose)(21)；2個甾醇類

6、化合物：β-谷甾醇(β-sitosterol)(22)，胡蘿卜甙(daucosterol)(23)。其中，除了化合物3、5、22和23外其它19個化合物均為首次從該屬植物當(dāng)中獲得。 采用實(shí)驗(yàn)性心肌缺血模型，觀察回心草乙酸乙酯部位及從中分離得到的各單體成分胡椒堿、胡椒酸甲酯、咖啡酸甲酯、尿嘧啶苷對血流動力學(xué)的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，停止灌流30min后可造成心肌明顯缺血缺氧，與正常組比較，對照組冠脈流量(CF)、心律(HR)、左室收縮

7、壓(LVSP)、左室最大下降速率(+dP/dtmax)顯著下降，左室最大上升速率(-dP/dtmax)顯著上升；乙酸乙酯部分(EA)和尿嘧啶苷(高、中劑量)、胡椒酸甲酯和咖啡酸甲酯(高、低劑量)、胡椒堿高劑量可顯著升高缺血心臟的LVSP、增加冠脈流量；EA高、中劑量，尿嘧啶苷中、低劑量可使其+dP/dtmax明顯恢復(fù)；除EA、尿嘧啶苷低劑量外，其他各組均可顯著減少-dP/dtmax的上升幅度，提示回心草乙酸乙酯部位和各單體成分可通過促進(jìn)

8、心肌缺血缺氧后收縮力的恢復(fù)，增加心肌冠脈血流量，從而增強(qiáng)心肌對缺血缺氧的耐受性，發(fā)揮顯著的心肌保護(hù)作用，其中乙酸乙酯活性部位的作用好于各單體成分，未見明顯的劑量依賴性。 采用過氧化氫誘導(dǎo)心肌細(xì)胞損傷模型，觀察回心草中分離得到的單體化合物齊墩果酸、2α-羥基齊墩果酸、2α-羥基烏蘇酸、芹菜素、槲皮素、咖啡酸的抗氧化作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：過氧化氫可造成心肌細(xì)胞明顯缺血缺氧，與空白組比較，模型組肌酸激酶同功酶(CK-MB)和乳酸脫氫酶(

9、LDH)顯著升高；芹菜素高劑量、槲皮素高劑量、咖啡酸各劑量均能夠明顯的降低過氧化氫作用后的損傷的心肌細(xì)胞CK-MB值；芹菜素(高、中劑量)、槲皮素(高、中劑量)、咖啡酸高劑量可顯著降低缺血心肌細(xì)胞的LDH值。提示黃酮類的芹菜素和槲皮素可改善缺血缺氧的心肌細(xì)胞的活力。黃酮類化合物是天然抗氧化劑，具有抗脂質(zhì)過氧化和抗活性氧自由基的作用，本研究中芹菜素和槲皮素通過抗氧化而減輕過氧化氫對心肌細(xì)胞的損傷；咖啡酸各劑量對CK-MB值均有顯著的降低作

10、用，但只有高劑量對LDH值有顯著影響，因此咖啡酸對過氧化氫損傷的心肌細(xì)胞有保護(hù)作用；齊墩果酸、2α-羥基齊墩果酸、2α-羥基烏蘇酸三種三萜對心肌細(xì)胞的缺血缺氧損傷無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示三萜類化合物是否具有該活性還需進(jìn)一步的研究。 采用RT-PCR技術(shù)觀察回心草單體成分胡椒堿對心肌β1受體的基因表達(dá)的影響，初步探討胡椒堿抗心肌缺血缺氧的作用機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：連續(xù)3d腹腔注射異丙腎上腺素(iso)后，模型組動物的心肌β1受體基因較之空