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文檔簡介
1、吊球草(Hyptis rhomboidea)為唇形科(Lamiaceae)山香屬(Hyptis)一年生草本植物,又被稱作石柳,四儉草,四方骨,假走馬風(fēng),螭蜍蜊等等。吊球草在廣東作為民間用藥,用于治療或輔助治療肝炎、潰瘍、水腫。經(jīng)過試驗初篩,吊球草醇提物具有較好的抗腫瘤活性,且國內(nèi)外對該植物研究尚處于空白階段,所以本論文以吊球草為研究對象,主要研究工作如下:
目的:在活性追蹤下對吊球草進(jìn)行化學(xué)成分的系統(tǒng)研究。對吊球草粗提物、不同
2、的萃取部位及部分單體進(jìn)行抗氧化活性、抑菌活性、細(xì)胞毒活性以及體內(nèi)抗腫瘤活性的測定與評價;在生態(tài)學(xué)上研究其作為入侵植物的化感作用,為探討吊球草中的藥效物質(zhì)基礎(chǔ),為進(jìn)一步開發(fā)利用該資源提供參考依據(jù)。
方法:(1)對吊球草全草通過75%乙醇浸提,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,通過粗分得到總提物(A)、石油醚部位(B)、乙酸乙酯部位(C)、正丁醇部位(D),正丁醇部位通過大孔吸附樹脂Diaion HP-20柱色譜,依次用含水甲醇
3、洗脫,得到20%甲醇部位(E),40%甲醇部位(F)。對 EtOAc部位通過硅膠柱色譜,用不同比例的石油醚-氯仿梯度洗脫,經(jīng)過反復(fù)柱色譜分離,分別得到Y(jié)5部位(G)、Y6-8部位(H)、Y6-9部位(I),Y7部位(J);EtOAc部位采用Toyopearl HW-40,Sephadex LH-20,MCI-Gel CHP-20,RP-18,PTLC及硅膠等色譜法對吊球草的化學(xué)成分進(jìn)行反復(fù)分離純化,根據(jù)理化性質(zhì)和現(xiàn)代波譜解析技術(shù)(1H-
4、NMR,13C-NMR,UV,IR,MS,HMQC,HMBC譜等)鑒定化合物的結(jié)構(gòu)。分離鑒定出11個化合物,所有化合物均是首次從吊球草中分離得到。
?。?)采用咸水蝦致死的生物活性測定法和抗腫瘤 MTT法對吊球草醇提物進(jìn)行細(xì)胞毒活性及抗腫瘤活性篩選,其中咸水蝦致死實驗中以蒸餾水為陰性對照,結(jié)果以LC50(μg·mL-1)表示。MTT法采用肺癌(H1299)、大腸癌 Lovo,結(jié)直腸癌SW480)、惡性黑色素瘤(A2058)、肝癌
5、(PLC)細(xì)胞株,對吊球草總提物進(jìn)行體外抗腫瘤活性篩選,結(jié)果以 LC50(μg·mL-1)表示。采用吊球草乙醇提物高、中、低劑量(13,6.5,3.25 mg/10g)對 ICR系荷H22腫瘤小鼠建立實體瘤、腹水瘤、免疫抑制模型,進(jìn)行體內(nèi)抗腫瘤活性實驗。
(3)采用DPPH、FRAP、ABTS法對吊球草粗提物A~D,G~J部位進(jìn)行抗氧化活性測定,以 Trolox為陽性對照,結(jié)果以 Trolox當(dāng)量(TEAC,mg/100g)表
6、示。
?。?)采用2倍稀釋法,選用8種植物病原真菌(小麥赤霉病菌(Fusarium graminearum,F.g)、大麥赤霉病菌(Fusarium graminearum Schwabe,F.gs)、黑根霉病菌(Rhizopus nigricans,R.n)、玉米大斑病菌(Exserohilum turcicum,E.t)、尖孢鐮刀菌(Fusarium oxysporum,F.o)、番茄灰霉病菌(Botrytis cinere
7、a,B.c)、核盤病菌(Sclerotinia sclerotiorum,S.s)、油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum(Lib.)de Bary,S.sc)對吊球草粗提物A~J部位以及單體化合物1,4~6,10進(jìn)行抗真菌活性測定,結(jié)果以MIC表示。
?。?)采用培養(yǎng)皿法和“小杯法”對吊球草莖、葉水浸液對八種農(nóng)作物種子(油菜、蘿卜、水稻、萵苣、綠豆、小麥、辣椒、黑麥草)進(jìn)行種子萌發(fā)和幼苗生長實驗研究,并
8、采用水浸液進(jìn)行咸水蝦致死實驗,以蒸餾水為陰性對照,結(jié)果以LC50(μg·mL-1)。
結(jié)果:(1)從吊球草75%乙醇提取物乙酸乙酯部位共分離出11個化合物,分別為咖啡酸乙酯(1)、熊果酸(2)、齊墩果酸(3)、vanillactic acid(4)、迷迭香酸甲酯(5)、山奈酚-3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(6)、山奈酚-3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷(7)、冬青素A
9、(8)、β-香樹脂醇(9)、山奈酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(紫云英苷,10)、山奈酚-3-O-α-L-吡喃鼠李糖-5-烯-3β,4β-二醇(11)。所有化合物均首次從該植物中分離得到。
?。?)咸水蝦致死的生物活性測定法中,A~D,G~J各部位的LC50(μg·mL-1)值分別為94.91,276.91,96.86,392.10,446.14,189.95,167.76μg·mL-1。采用 MTT法和肺癌(H1299)、大
10、腸癌(Lovo)、結(jié)直腸癌(SW480)、惡性黑色素瘤(A2058)、肝癌(PLC)細(xì)胞株,對吊球草乙醇提取物進(jìn)行體外抗腫瘤活性實驗,吊球草醇提物對肺癌(H1299)、大腸癌(Lovo)、結(jié)直腸癌(SW480)、惡性黑色素瘤(A2058)、肝癌(PLC)的LC50μg·mL-1分別為8、18、23、12、50μg·mL-1。H22肝癌實體瘤模型中,吊球草乙醇提取物的高、中、低劑量組的抑瘤率分別為68.83%,59.24%,46.40%;
11、其中高、中劑量組均可使小鼠脾臟指數(shù)(SI)升高,與模型對照組相比差別具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),ELISA分析結(jié)果顯示,高、中劑量組能改善小鼠外周血 TNF-α,IL-2,ALT,AST含量,腫瘤切片染色結(jié)果顯示,模型組小鼠腫瘤細(xì)胞增生活躍,氣泡較多,CTX及高、中劑量組腫瘤細(xì)胞較為稀疏,氣泡較少。腹水瘤模型組中,高劑量組延長小鼠生命時間比模型組平均20天,免疫抑制模型組中,高劑量組能提高小鼠的生存質(zhì)量。
(3)吊球草A~
12、D,G~J部位的抗氧化活性實驗中,DPPH方法結(jié)果顯示H、I、C、A部位的TEAC值大于Trolox,H部位具有較好的抗氧化活性;ABTS方法結(jié)果顯示H、C、A部位的TEAC值大于Trolox,H部位具有較好的抗氧化活性;FRAP方法結(jié)果顯示H、I、A、C、J、D、E、G部位的TEAC值大于Trolox,H部位具有較好的抗氧化活性。
?。?)抑菌活性實驗表明:乙酸乙酯部位的細(xì)分部位對8種植物病原真菌的抑制作用明顯,主要對大、小麥
13、赤霉菌抑制明顯。測試的單體化合物(酚酸類)對大部分病原菌具有較好的抑制作用?;衔?、4、5對大麥赤霉病菌、小麥赤霉病菌、玉米大斑病菌和核盤菌有抑制作用,其中以化合物1和5的抑制作用最強(qiáng)?;衔?僅對油菜菌核病菌有抑制作用,化合物10對玉米大斑病菌和油菜菌核病菌均有抑制效果。
?。?)吊球草莖葉水浸提液對八種種子的化感作用有明顯差別,對萵苣、小麥呈促進(jìn)作用;對油菜、蘿卜、水稻、綠豆、辣椒及黑麥草呈抑制作用,對水稻和綠豆的抑制作用
14、明顯小于油菜、蘿卜、辣椒、黑麥草;油菜和蘿卜的相差不明顯,與辣椒和黑麥草相差明顯。即兩種水浸液對辣椒、黑麥草抑制作用最強(qiáng),其次是油菜、蘿卜,再次是水稻、綠豆,且葉水浸液的化感抑制作用強(qiáng)于莖水浸液。
結(jié)論:(1)吊球草化學(xué)成分結(jié)構(gòu)類型主要為酚酸類、黃酮類及萜類化合物。(2)吊球草乙醇提物在體外具有一定的細(xì)胞毒活性,體內(nèi)具有一定的抗腫瘤活性及提高免疫能力活性。
?。?)吊球草乙醇提物具有較好的抗氧化活性,以乙酸乙酯部位的活
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