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1、分類號:R77密級:學(xué)位類別:科學(xué)學(xué)位口專業(yè)學(xué)位√o學(xué)校代碼:10062學(xué)號:2011701030學(xué)科門類:醫(yī)學(xué)又坪鼉科鼻號TlA—JI—M纛DlCI瞧UNIVE萋lSlTY博士學(xué)位論文DoCToRALDISSERTATIoN論文題目:晶狀體上皮細胞光損傷與活性氧作用及TGF182/Smad3信號傳導(dǎo)通路的研究TITLEStudyonphoticinjuryandreactiveoxygenandTGFD2/Smad3signaling
2、pathwayinlensepithelialcells一級學(xué)科:臨床醫(yī)學(xué)二級學(xué)科:眼科學(xué)論文作者:魏樹瑾指導(dǎo)教師:湯欣教授天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二。一四年五月天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文中文摘要目的:白內(nèi)障是全世界首位的致盲性眼病,雖然不同的損傷因子導(dǎo)致白內(nèi)障的通路和機制各不相同,但是它們大多通過一共同的中間產(chǎn)物——活性氧,累積的光暴露誘發(fā)的活性氧自由基所導(dǎo)致的晶狀體上皮細胞凋亡與老年性白內(nèi)障的發(fā)生關(guān)系密切,另外TGF132/Smad3信號
3、傳導(dǎo)通路與白內(nèi)障及晶狀體上皮細胞凋亡之問的關(guān)系得到越來越多的關(guān)注。本研究采用發(fā)光二極管(1ightemittingdiode,LED)光源制作晶狀體上皮細胞(1ensepithelialcell,LEC)光損傷模型,探討LEC光損傷與活性氧和TGF一[3JSmad3信號傳導(dǎo)通路之間的關(guān)系,本研究進一步觀察了具有活性氧清除作用的丹參素和阻斷TGF132/Smad3信號傳導(dǎo)通路對LED光源誘導(dǎo)人晶狀體上皮細胞光損傷所致凋亡的影響,進一步評價
4、了活性氧和TGFB2/Smad3信號傳導(dǎo)通路在以上過程中的作用。方法:本研究包括三部分:1使用LED光源20000勒克斯照度0h、6h、12h、24h照射LEC,使用流式細胞術(shù)檢測LEC內(nèi)活性氧的表達及細胞凋亡情況,分別使用Real—timePCR和Westernblotting檢測BAX和TGFB2mRNA和蛋白表達,使用四甲基噻唑藍(MTT)法檢測細胞增殖。2在第一部分基礎(chǔ)上,使用具有活性氧清除功能的丹參素,觀察丹參素光照組和光照組
5、LEC在LED光源20000勒克斯照度照射24h后,細胞內(nèi)活性氧的表達、細胞凋亡率、BAX基因和BAx蛋白表達等各項指標的差異。3以pSilencer21U6neo為質(zhì)粒載體,構(gòu)建Smad3的siRNA表達質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化大腸桿菌、酶切、測序進行鑒定,利用siRNA阻斷Smad3信號傳導(dǎo)通路后,觀察其與對照組在LED光源20000勒克斯照度照射24h后,細胞凋亡率、BAX基因和BAX蛋白表達等各項指標的差異。結(jié)果:1光照0h組、6h組、12h
6、組、24h組LEC內(nèi)活性氧平均熒光強度、早期凋亡率、總凋亡率隨光照時間的延長逐漸上升,且各組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(尸005)。光照6h、12h、24h組,BAX的mRNA表達較0h組分別升高約145倍、545倍和1586倍,TGF132的mRNA表達分別升高約122倍、179倍和401倍,各組問表達差異有統(tǒng)計學(xué)意義(JP005)。光照24h組BAX和TGF132蛋白的表達量分別較0h組升高約185倍和2倍。MTT實驗0h組和24h組在57
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