GSH、過氧化氫酶抑制TGF-β2誘導(dǎo)兔晶狀體上皮細(xì)胞凋亡及間質(zhì)化研究.pdf

1、目的：
　　 研究體外培養(yǎng)的兔晶狀體上皮細(xì)胞(Lens epithelial cells，LECs)加入轉(zhuǎn)化生長因子-β2(transforming growth factor，TGF-β2)及抗氧化劑谷胱甘肽(glutathione，GSH)、過氧化氫酶(catalase，CAT)后，晶狀體上皮細(xì)胞的增殖、凋亡及平滑肌肌動蛋白(α-Smooth muscle actin，α-SMA)mRNA的表達(dá)情況。探討抗氧化劑影響TGF-

2、β2誘導(dǎo)的晶狀體上皮細(xì)胞凋亡及間質(zhì)化的作用機(jī)制。
　　 材料與方法：
　　 隨機(jī)選取健康2～4周的家兔，雌雄及重量不限(鄭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供)。耳緣靜脈空氣栓塞處死，體外培養(yǎng)晶狀體上皮細(xì)胞，觀察細(xì)胞形態(tài)。細(xì)胞接近融合傳代，取2、3代傳代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，分別加入A：75pg/mlTGF-β2；B：75pg/mlTGF-β2+10mMGSH；C：75pg/mlTGF-β2+300U/mLCAT；D：10mMGSH；E：30

3、0U/mLCAT；F：空白對照組。倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，MTT法檢測12、24、48小時的細(xì)胞增殖抑制率，TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡，逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)法檢測細(xì)胞α-SMA mRNA含量，各處理組間比較分析。
　　 結(jié)果：
　　 1.倒置顯微鏡下觀察，三天后原代細(xì)胞從囊膜邊緣長出，細(xì)胞較透亮，形態(tài)呈多角形，伸出偽足胞漿較豐富。加入75pg/mlTGF-β2后，細(xì)胞間隙增加，呈現(xiàn)拉網(wǎng)狀改變，細(xì)胞開始出現(xiàn)腫脹并隨

4、時間的推移細(xì)胞呈梭形改變，加入抗氧化劑后細(xì)胞改變減少。
　　 2.MTT法檢測晶狀體上皮細(xì)胞增殖抑制率：檢測12、24、48h三個時間點(diǎn)，A組的細(xì)胞增殖抑制率分別為14.6±a：4.62％，28.8±3.83％，34.2±2.49％，B組細(xì)胞增殖抑制率分別為15.4±5.13％，28.6±3.78％，31.0±4.18％，C組細(xì)胞增殖抑制率分別為14.6±3.36％，27.2±3.96％，33.6±2.50％，A分別與B、C組比

5、較P>0.05，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 3.TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡：熒光顯微鏡下觀察凋亡細(xì)胞呈綠色熒光。D、E、F組偶見呈綠色熒光的細(xì)胞，A組有較多綠色熒光細(xì)胞。B、C組綠色熒光的細(xì)胞數(shù)量明顯減少。每個處理組隨機(jī)選擇三個視野，以凋亡細(xì)胞數(shù)量/視野細(xì)胞總數(shù)量來計算細(xì)胞凋亡率，F(xiàn)=142.873，P<0.05，各組之間細(xì)胞凋亡率不完全相同。A組細(xì)胞凋亡率為30.78±3.17％，分別與B、C組細(xì)胞凋亡率比較P<0.05，差異有統(tǒng)

6、計學(xué)意義。
　　 4.RT-PCR檢測晶狀體上皮細(xì)胞中α-SMA蛋白mRNA表達(dá)：各實(shí)驗(yàn)組在516bp處出現(xiàn)特異性α-SMA條帶。A組α-SMA mRNA灰度值為0.863±0.020，分別與B、C組α-SMA mRNA灰度值比較P<0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)論：
　　 1.TGF-β2可以抑制LECs增殖，并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，促進(jìn)上皮細(xì)胞間質(zhì)化。
　　 2.加入抗氧化劑GSH、CAT后可以降低L