雌激素對(duì)過氧化氫誘導(dǎo)大鼠晶狀體上皮細(xì)胞調(diào)亡的抑制作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:通過體外培養(yǎng)大鼠晶狀體，探討雌激素對(duì)實(shí)驗(yàn)性氧化損傷大鼠晶狀體上皮細(xì)胞凋亡的影響。 材料和方法:體外培養(yǎng)健康成年Sprsgue-Dawley(SD)大鼠晶狀體120個(gè)，分為雌、雄兩組。雌性大鼠晶狀體60個(gè)，雄性大鼠晶狀體60個(gè)，置入無酚紅DMEM培養(yǎng)液中培養(yǎng)。按培養(yǎng)液中添加的成分差異，再將兩組晶狀體分別隨機(jī)分為4組：空白對(duì)照組、17β-雌二醇(17β-E2)組、過氧化氫(H2O2)組、17β-E2+H2O2組。給予終濃度為5

2、00μmol/L的H2O2復(fù)制白內(nèi)障模型，加入終濃度為8μmol/L的17β-W2干預(yù)。顯微鏡下動(dòng)態(tài)觀察各組晶狀體混濁程度，并量化比較培養(yǎng)24、48、72小時(shí)后各組晶狀體混濁程度差異。分別于培養(yǎng)24、48、72小時(shí)后，在顯微鏡下撕取各組晶狀體前囊膜鋪片，采用末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記技術(shù)(TUNEL)檢測(cè)各組晶狀體上皮細(xì)胞凋亡及凋亡率。透射電子顯微鏡觀察晶狀體上皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變。 結(jié)果:實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，終濃度為

3、500μmol/L的H2O2可誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的大鼠晶狀體形成白內(nèi)障，隨培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)，晶狀體混濁程度加重。終濃度為8μmol/L的17β-E2能夠減輕雌性大鼠晶狀體混濁程度，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，但不能減輕雄性大鼠晶狀體混濁程度(P＞0.05)。雌性大鼠晶狀體在17β-E2作用下能對(duì)抗氧化應(yīng)激，減少上皮細(xì)胞凋亡率，H2O2組與17β-E2+H2O2組比較，兩組細(xì)胞凋亡率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。17β-E2不能保護(hù)雄性大鼠晶

4、狀體對(duì)抗氧化應(yīng)激，H2O2組與17β-E2+H2O2組比較，兩組細(xì)胞凋亡率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。雌性和雄性大鼠晶狀體，空白對(duì)照組與17β-E2組比較晶狀體混濁程度和細(xì)胞凋亡率，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。培養(yǎng)72小時(shí)后晶狀體上皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)研究顯示，雌性H2O2組晶狀體上皮細(xì)胞絕大多數(shù)發(fā)生凋亡，呈凋亡各期形態(tài)學(xué)改變；17β-E2+H2O2組晶狀體上皮細(xì)胞部分發(fā)生凋亡；正常對(duì)照組與17β-E2組很少晶狀體上皮細(xì)胞發(fā)生凋