核心蛋白多糖對(duì)兔晶狀體上皮細(xì)胞增生的抑制作用.pdf

1、目的:探討核心蛋白多糖(Decorin)對(duì)兔晶狀體上皮細(xì)胞(lens epithelial cells, LEC)增殖的抑制作用及其劑量一效應(yīng)與時(shí)間一效應(yīng)的關(guān)系,為藥物防治后發(fā)性白內(nèi)障提供新的選擇。
　　方法:MTT比色法分別測(cè)定不同濃度的Decorin(0.1mg·L-1,1mg·L-1,10mg·L-1)作用于LEC不同時(shí)間后的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率;采用流式細(xì)胞技術(shù)測(cè)定細(xì)胞周期,用ELISA法檢測(cè)各組培養(yǎng)液上清中TGF-β的水平,R

2、T-PCR測(cè)定TGF-βmRNA的表達(dá),免疫細(xì)胞化學(xué)觀察α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-Smooth muscle actin,α-SMA)。
　　結(jié)果:MTT比色法實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,24h對(duì)照組抑制率為(3.62±1.34)％,0.1mg·L-1,1mg·L-1和10mg·mL-1，Decorin組抑制率分別為(4.14±2.08)％,(12.93±2.47)％,(23.47±1.78)％,LEC生長(zhǎng)抑制率增加(P＜0.05),隨著Deco

3、rin作用時(shí)間延長(zhǎng),生長(zhǎng)抑制率增加(P＜0.05),流式細(xì)胞技術(shù)示,隨藥物濃度及作用時(shí)間延長(zhǎng),LEC出現(xiàn)明顯的G0/G1期阻滯,G0/G1期細(xì)胞所占比例明顯升高(P＜0.05),ELISA示,對(duì)照組TGF-β水平為427.24±41.34 ng/細(xì)胞,0.1 mg·L-1,1 mg·L-1和10mg·mL-1，Decorin組TGF-β水平分別為236.01±28.63 ng·細(xì)胞-1,117.86±18.14 ng·細(xì)胞-1,111.

4、72±26.72 ng·細(xì)胞-1,與對(duì)照組有明顯的差別(P＜0.05),RT-PCR示Decorin組TGF-βmRNA表達(dá)明顯減少,與MTT法檢測(cè)結(jié)果呈現(xiàn)大致相同的趨勢(shì),免疫細(xì)胞化學(xué)觀察,對(duì)照組α-SMA表達(dá)較多,細(xì)胞肥大,細(xì)胞質(zhì)呈棕色,Decorin組α-SMA較少表達(dá)。Decorin表現(xiàn)出明顯的抑制作用。
　　結(jié)論:Decorin對(duì)LEC有抑制增生和誘導(dǎo)凋亡作用,且呈明顯的劑量-效應(yīng)與時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系,可望成為后發(fā)性白內(nèi)障的防