LY294002對(duì)bFGF誘導(dǎo)的兔眼晶狀體上皮細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、目的：
　　 隨著白內(nèi)障手術(shù)的不斷完善，以往的白內(nèi)障手術(shù)并發(fā)癥，如：玻璃體前界膜破裂致玻璃體脫出、角膜失代償、虹膜睫狀體炎、眼內(nèi)炎、青光眼、人工晶狀體脫位及半脫位等已明顯減少，而晶狀體后囊膜混濁(Posterier CapsulerOpacification，PCO)已成為現(xiàn)代白內(nèi)障手術(shù)(囊外摘除及人工晶體植入)術(shù)后的主要并發(fā)癥之一。
　　 多年來(lái)預(yù)防后發(fā)障發(fā)生的研究主要集中在抑制殘留的晶體上皮細(xì)胞繼續(xù)增殖和遷移。其中包

2、括非藥物性和藥物性?xún)蓚€(gè)方面。因非藥物性抑制晶體上皮細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖的研究沒(méi)能得出滿(mǎn)意的結(jié)果，目前的研究則主要集中在藥物抑制晶狀體上皮細(xì)胞增殖。而近些年研究的一些藥物，如：抗代謝藥物，天然草藥，組織纖溶酶原激活劑，抗炎藥，免疫毒素及細(xì)胞毒素等均因其毒副作用較強(qiáng)而未應(yīng)用于臨床。近幾年的研究則側(cè)重于通過(guò)不同途徑影響bFGF的促增殖作用而抑制晶狀體上皮細(xì)胞的增殖和遷移。
　　 LY294002為磷酸肌醇3激酶(phosphatidylino

3、sitol3-kinase，PI3K)通道抑制劑，PI3K是許多生命活動(dòng)中關(guān)鍵的信號(hào)分子，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的分裂、分化、凋亡等活動(dòng)，并已報(bào)道其也參與LECs的增殖[1，8]。絲氨酸/蘇氨酸激酶AKT(serine/theonine kinase AKT，又稱(chēng)為PKB)是P13K下游直接的靶蛋白，AKT是一種多功能調(diào)節(jié)因子，參與細(xì)胞生存和凋亡的調(diào)控。
　　 多種生長(zhǎng)因子都能通過(guò)生長(zhǎng)因子受體上酪氨酸(Y740/Y751)位點(diǎn)磷酸化后產(chǎn)生

4、與P13K的p85亞基結(jié)合的高親和位點(diǎn)，誘導(dǎo)PKB的激活，此激活過(guò)程能被P13K特異抑制劑wortmannin及LY294002所阻斷。主要機(jī)制為wortmannin及LY294002與P13K的p110亞基呈非競(jìng)爭(zhēng)性不可逆性結(jié)合，從而阻斷下游AKT的激活，起到抑制細(xì)胞增殖和遷移的作用。磷酸肌醇3激酶(P13K)通道抑制劑的毒副作用較小有望成為預(yù)防PCO的理想藥物。
　　 本實(shí)驗(yàn)將不同濃度的LY294002加入體外培養(yǎng)的兔晶狀體

5、上皮細(xì)胞干預(yù)其增殖。通過(guò)MTT檢測(cè)細(xì)胞抑制率及流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期。觀察LY294002對(duì)兔眼晶狀體上皮細(xì)胞的抑制程度及對(duì)bFGF促進(jìn)增殖作用的影響。
　　 材料與方法
　　 體外培養(yǎng)的兔晶狀體上皮細(xì)胞分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，其中對(duì)照組包括空白對(duì)照和bFGF對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組包括單獨(dú)用LY294002和聯(lián)合用bFGF組，空白對(duì)照組為不含血清的DMEM培養(yǎng)液，bFGF對(duì)照組為空白對(duì)照這組+bFGF(10ng/mL)，藥物處理組分

6、為兩組：①5個(gè)單獨(dú)用藥組(10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L、10-4mol/L)；②5個(gè)聯(lián)合用藥組(10-8mol/L、10-7mol/L、10-7mol/L、10-5mol/L、10-4mol/L)+bFGF(10ng/mL)。取生長(zhǎng)良好的第3代兔LEC細(xì)胞傳代于培養(yǎng)板及培養(yǎng)瓶中，常規(guī)培養(yǎng)后，按上述分組加入不同濃度藥物，培養(yǎng)48小時(shí)后MTT檢測(cè)抑制率及流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期。
　　

7、 結(jié)果：
　　 1.MTT檢測(cè)LY294002對(duì)LEC增殖的抑制作用
　　 在單獨(dú)應(yīng)用LY294002組內(nèi)，各LY294002組與空白對(duì)照組相比顯示：10-8mol/L作用48 h后對(duì)兔LECs無(wú)明顯抑制作用(P>0.01)，10-4、10-5、10-6、10-7mol/L濃度作用48 h后均對(duì)兔LECs有明顯的抑制作用(P<0.01)；各聯(lián)合用藥組與陽(yáng)性對(duì)照組相比，10-8mol/L作用48 h后對(duì)兔LECs有輕微抑制

8、作用(P=0.008)，10-4、10-5、10-6、10-7mol/L作用48 h后均對(duì)兔LECs有明顯的抑制作用(P<0.01)；空白對(duì)照組與陽(yáng)性對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　 2.LY294002對(duì)兔LEC的細(xì)胞周期的影響
　　 兔LEC經(jīng)LY294002作用48h后，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比，G0/G1期細(xì)胞增多，而S期和G2/M期細(xì)胞減少。
　　 細(xì)胞G0/G1期分析示：LY294002組

9、，10-8 mol/L濃度作用48 h后，與空白對(duì)照組相比對(duì)兔LECs無(wú)明顯抑制作用(P>0.01)；10-4、10-5、10-6、10-7mol/L作用48h后，與空白對(duì)照組相比對(duì)兔LECs均有明顯的抑制作用(P<0.01)；聯(lián)合用藥組內(nèi)，10-8mol/L濃度作用48 h后，與陽(yáng)性對(duì)照組相比對(duì)兔LECs無(wú)明顯抑制作用(P>0.01)，10-4、10-5、10-6、10-7mol/L濃度作用48 h后，與陽(yáng)性對(duì)照組相比對(duì)兔LECs均有

10、明顯的抑制作用(P<0.01)；空白對(duì)照組與陽(yáng)性對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，S期及G2/M期分析結(jié)果大致同G0/G1期。
　　 結(jié)論：
　　 1.LY294002能抑制兔眼晶狀體上皮細(xì)胞的增殖。
　　 2.bFGF能促進(jìn)兔眼晶狀體上皮細(xì)胞的增殖，并作用后處于增殖期的兔眼晶狀體上皮細(xì)胞明顯增多。
　　 3.高濃度LY294002能將bFGF的促細(xì)胞增殖作用阻斷，并作用后處于增殖期的兔眼晶狀體