Thapsigargin抑制體外培養(yǎng)的人晶狀體上皮細(xì)胞增殖及防治兔眼后發(fā)性白內(nèi)障的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文Thapsigargin抑制體外培養(yǎng)的人晶狀體上皮細(xì)胞增殖及防治兔眼后發(fā)性白內(nèi)障的實(shí)驗(yàn)研究姓名：姬紅培申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：眼科學(xué)指導(dǎo)教師：吳明星20060512T h a p s i g a r g i n 抑制體外培養(yǎng)的人品狀體上皮細(xì)胞增殖及防治兔眼后發(fā)性白內(nèi)障的實(shí)驗(yàn)研究 中I l f 大學(xué)物。為進(jìn)一步研究T G 抑制晶狀體上皮細(xì)胞增殖的機(jī)制，探討T G 應(yīng)用于后發(fā)性白內(nèi)障防治的可能性，我們運(yùn)用不同濃度的T G

2、 處理體外培養(yǎng)的人晶狀體上皮細(xì)胞系S R A O I ／0 4 ，研究T G 增殖抑制發(fā)生的分子機(jī)制；并將兩種不同濃度的T G 注入兔眼白內(nèi)障術(shù)后的晶體囊袋內(nèi)，觀察它對(duì)兔眼后發(fā)性內(nèi)障形成的影響。本研究工作主要包括以下兩部分：第一部分T h a p s i g a r g i n 對(duì)體外培養(yǎng)的人晶狀體上皮細(xì)胞系S R A 0 I ／0 4 增殖抑制作用及機(jī)制探討目的：研究t h a p s i g a r g i n ( T G ) 對(duì)體

3、外培養(yǎng)的晶狀體上皮細(xì)胞增殖的影響，并探討細(xì)胞增殖抑制的分子機(jī)制。方法：不同濃度的T G 處理S R A O I ／0 4 細(xì)胞7 2 小時(shí)，噻唑藍(lán)比色法( M T T ) 分析細(xì)胞增殖改變；透射電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化：末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法( T U N E L ) 檢測(cè)細(xì)胞核中脫氧核糖核酸( D N A ) 的斷裂情況；流式細(xì)胞儀( 碘化丙啶，P T 法) 檢測(cè)細(xì)胞周期中亞G 。期含量；并通過(guò)激光共焦顯微鏡利流式

4、細(xì)胞儀檢測(cè)C a s p a s e 3 活性亞單位( 1 7 ／1 9 K D ) 的表達(dá)及細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)率。結(jié)果：M T T 法顯示T G 為0 ．3 2 5 ～5 u M 時(shí)，細(xì)胞增殖抑制率變化顯著，I c 。大約為0 ．8I J - M 。透射電鏡下見(jiàn)T G 處理S R A O I ／0 4 細(xì)胞膜皺縮，染色體濃縮、邊集、核膜裂解、凋亡小體形成。0 ，0 ．1 ，0 ．5 ，l ，1 0 u M T G 處理S R A O I ／

5、0 4 細(xì)胞7 2小時(shí)，流式細(xì)胞儀( P I 法) 及T U N E L 法檢測(cè)細(xì)胞凋亡率隨著T G 濃度的增加而增加，呈濃度依賴性。T G 激活C a s p a s e 3 ，細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)率也呈濃度依賴性增加；T G 為1 0 u M 時(shí)，幾乎每一個(gè)細(xì)胞漿內(nèi)C a s p a s e 3 都被激活。結(jié)論：T h a p s i g a r g i n 激活C a s p a s e 3 ，通過(guò)c a s p a s e 家旗級(jí)聯(lián)反應(yīng)