去整合素Kistrin對人晶狀體上皮細(xì)胞株黏附、增殖的影響.pdf

1、目的：隨著白內(nèi)障手術(shù)技術(shù)的不斷提高及儀器設(shè)備的不斷更新，手術(shù)并發(fā)癥如角膜失代償、繼發(fā)性青光眼等眼病逐漸減少，而后囊混濁(posteriorcapsule opacification，PCO)成為影響術(shù)后遠(yuǎn)期視力恢復(fù)的突出問題。成人PCO的發(fā)生率約為20％～50％，兒童則幾乎達(dá)到100％，手術(shù)組的年齡越小，發(fā)生率越高。雖然可以通過二期手術(shù)或YAG激光后囊膜切開術(shù)治療，但不僅增加了額外費(fèi)用，而且不可避免會(huì)出現(xiàn)新的并發(fā)癥。因此人們一直在探索安

2、全、有效的藥物治療PCO?，F(xiàn)代白內(nèi)障摘除術(shù)后殘留的晶狀體上皮細(xì)胞(lens epithelial cells，LECs)的黏附、增殖在PCO的形成過程中起著極為重要的作用，因此阻斷LECs的黏附，減少LECs增殖，是發(fā)展防治PCO藥物的一個(gè)重要策略。含RGD序列的多肽，尤其是蛇毒去整合素(disintegrin)在抗腫瘤細(xì)胞黏附和增殖的作用，引起了人們的關(guān)注，逐漸將此類藥物應(yīng)用于其它有關(guān)細(xì)胞黏附的領(lǐng)域，但使用去整合素干預(yù)PCO發(fā)展的研究

3、國內(nèi)外均鮮見報(bào)道。為研究去整合素對LECs的作用，本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，采用MTT法，觀察去整合素Kistrin對人晶狀體上皮細(xì)胞株SRA01/04黏附、增殖的抑制作用，為Kistrin治療PCO提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：實(shí)驗(yàn)分為兩部分：①檢測Kistrin對SRA01/04細(xì)胞黏附的影響：將細(xì)胞用含10％胎牛血清的DMEM/F<,12>培養(yǎng)基懸浮，在37℃、5％CO<,2>條件下，與5個(gè)不同濃度的去整合素Kistrin(40

4、ng/ml、80ng/ml、160ng/ml、320ng/ml、640ng/ml)和RGD肽(0.125mg/ml、0.25 mg/ml、0.5 rag/ml、1.0mg/ml、2.0mg/ml)一起孵育30min。然后接種于涂有鼠尾膠原的96孔培養(yǎng)板，細(xì)胞濃度為2.5×10<'4>個(gè)/孔，在37℃、5％CO<,2>條件下，一起孵育90min后，用PBS輕洗各孔兩次，棄去未貼壁細(xì)胞，MTT法測定各孔吸光度值。②檢測Kistrin對SRA

5、01/04細(xì)胞增殖的影響：將懸浮細(xì)胞接種于涂有鼠尾膠原的96孔培養(yǎng)板培養(yǎng)，細(xì)胞濃度為1X10<'4>個(gè)/孔，12h后棄原培養(yǎng)液，換無血清DMEM/F<,12>培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)24h，使細(xì)胞同步化。棄舊培養(yǎng)液，加入同上濃度的Kistrin和RGD肽溶液，37℃、5％CO2條件下共同孵育,分別于24h，48h，72h后，MTT法測定各孔吸光度值。 結(jié)果： 1、Kistrin和RGD肽對SRA01/02細(xì)胞在鼠尾膠原基質(zhì)上的黏附

6、有一定的抑制作用，并呈濃度依賴關(guān)系，40ng/ml、80ng/ml、160ng/ml、320ng/ml、640ng/ml濃度組Kistrin的黏附抑制率分別為3.7％、7.8％、15.9％、22.7％、33.4％，0.125mg/ml、0.25 mg/ml、0.5 mg/ml、1.0mg/ml、2.0mg/ml濃度的RGD肽的黏附抑制率分別為5.1％、12.2％、19.0％、25.9％和35.1％。除最低濃度外，各組平均OD值與陰性對照

7、組相比，差異有顯著性(P<0.05)。Kistrin組半數(shù)抑制濃度(IC<,50>)=918.1ng/ml，RGD組IC<,50>=2.7mg/ml。Kistrin對SRA01/04細(xì)胞的抗黏附作用比RGD肽強(qiáng)約3.0×10<'3>倍。 2、Kistrin和RGD肽對SRA01/04細(xì)胞的增殖具有較強(qiáng)的抑制作用，并且隨著質(zhì)量濃度增加和作用時(shí)間的延長，抑制增殖的作用也顯著增強(qiáng)。抑制作用在48h，72h均與24h之間有顯著性差異(P

8、<0.05)。Kistrin和RGD肽對SRA01/04細(xì)胞干預(yù)24h、48h、72h后的抑制增殖IC<,50>分別為640.5ng/ml、429.8 ng/ml、303.0 ng/ml和2.03mg/ml、1.27 mg/ml、0.87 mg/ml。在這三個(gè)時(shí)間點(diǎn)內(nèi)，Kistrin的對SRA01/04細(xì)胞的抗增殖作用較RGD強(qiáng)2.9×10<'3>～3.2×10<'3>倍。 3、較高濃度Kistrin對體外培養(yǎng)的SRA01/04

9、細(xì)胞有誘導(dǎo)其凋亡的作用。 結(jié)論： 1、本研究通過MTT法證實(shí)了Kistrin和RGD肽對SRA01/04細(xì)胞有黏附、增殖抑制作用。黏附抑制作用隨藥物濃度增加而增強(qiáng)；增殖抑制作用隨藥物濃度及干預(yù)時(shí)間增加而增強(qiáng)，48h和72h均與24h之間有顯著性差異，以72h增殖抑制作用最明顯。 2、在抑制SRA01/04細(xì)胞黏附和增殖方面，Kistrin的作用均較RGD肽強(qiáng)2.9×10<'3>倍以上。 3、較高濃度Kis