活性氧導(dǎo)致腸上皮細(xì)胞線粒體結(jié)構(gòu)與功能損傷的初步研究.pdf

1、該研究首先在體外模擬活性氧損傷腸上皮細(xì)胞的作用,即采用H<,2>O<,2>(一種活性氧的代表)建立損傷細(xì)胞模型,觀察不同濃度的H<,2>O<,2>對(duì)細(xì)胞(SW 480)線粒體結(jié)構(gòu)和功能的影響、膜電位改變與細(xì)胞凋亡的關(guān)系以及相關(guān)基因(如bcl-2)的表達(dá)情況.其次,我們采用4mM H<,2>O<,2>處理細(xì)胞后進(jìn)行線粒體DNA的提取,對(duì)細(xì)胞色素c氧化酶(COX Ⅰ、COXⅡ、COXⅢ)、ATP合成酶(ATP6 亞基、ATP8亞基)基因進(jìn)行

2、PCR擴(kuò)增,并將PCR產(chǎn)物進(jìn)行直接測(cè)序;同時(shí)于該時(shí)相點(diǎn)進(jìn)行上述兩個(gè)酶活性的測(cè)定.鑒于H<,2>O<,2>可導(dǎo)致腸上皮細(xì)胞的凋亡,并導(dǎo)致mtDNA編碼細(xì)胞色素c氧化酶基因產(chǎn)生突變,造成該酶活性的下降.為此,我們采用生物信息學(xué)技術(shù),運(yùn)用計(jì)算機(jī)同源模建的方法先后模擬了人天然細(xì)胞色素c氧化酶亞單位COXⅠ和其突變體、天然細(xì)胞色素c氧化酶亞單位COXⅡ及其突變體、天然細(xì)胞色素c氧化酶亞單位COXⅢ的空間結(jié)構(gòu),并利用已有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),結(jié)合模建的結(jié)果進(jìn)