線粒體活性氧與糖尿病視網(wǎng)膜病變關(guān)系及機(jī)制的研究.pdf

1、復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文線粒體活性氧與糖尿病視網(wǎng)膜病變關(guān)系及機(jī)制的研究姓名：崔彥申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：眼科學(xué)指導(dǎo)教師：許迅20060410●●●復(fù)旦太學(xué)博：|：研究生論文線粒饞活性氧s糖尿確視趣膜病變關(guān)系及帆翻的研究焦顯微鏡檢測不同葡萄糖濃度下內(nèi)皮細(xì)胞、周細(xì)胞線粒體活性氧產(chǎn)生量的變化。②采用流式細(xì)胞儀檢測不同葡萄糖濃度下線粒體膜電位、細(xì)胞死亡率的變化。⑨免疫細(xì)胞化學(xué)及免疫熒光方法檢測內(nèi)皮細(xì)胞、周細(xì)胞表達(dá)UCPl—5中何種異構(gòu)體。RTPCR

2、檢測培養(yǎng)細(xì)胞MnSOD、解藕聯(lián)蛋白UCPl3表達(dá)情況以及不同葡萄糖濃度下的變化。結(jié)果①隨著培養(yǎng)基中葡萄糖濃度的增加，內(nèi)皮細(xì)胞、周細(xì)胞線粒體活性氧的產(chǎn)生呈增多趨勢。②隨著培養(yǎng)基中葡萄糖濃度的增加，內(nèi)皮細(xì)胞線粒體膜電位逐漸升高，細(xì)胞死亡率逐漸增多，而周細(xì)胞則無此變化趨勢。③經(jīng)免疫細(xì)胞化學(xué)及免疫熒光方法檢測，牛視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞、周細(xì)胞中UCPl及UCP2兩種異構(gòu)體表達(dá)呈陽性，而UCP3、UCP4及UCP5均呈陰性。通過RTPCR檢測到UC

3、Pl、UCP2mRNA，不表達(dá)UCP3。UCPl、2、MnSOD表達(dá)量隨培養(yǎng)基中葡萄糖濃度的變化而變化。結(jié)論高糖可以誘導(dǎo)培養(yǎng)的視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞、周細(xì)胞線粒體活性氧產(chǎn)生增多；內(nèi)皮細(xì)胞活性氧產(chǎn)生的增多與線粒體膜電位增高之間存在反饋調(diào)節(jié)；牛視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞、周細(xì)胞表達(dá)UCPl及UCP2兩種異構(gòu)體；高糖條件下UCPl、2、MnSOD表達(dá)量代償性增多調(diào)節(jié)活性氧的產(chǎn)生，但是當(dāng)葡萄糖濃度升高到一定程度時(shí)，代償機(jī)制消失；內(nèi)皮細(xì)胞、周細(xì)胞在高糖條

4、件下表現(xiàn)出的不同特征，說明其在糖尿病性視網(wǎng)膜病變的發(fā)生中起著不同的作用。I關(guān)鍵詞】活性氧；線粒體；細(xì)胞培養(yǎng)；逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)中圖分類號：R774第二部分STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中UCPs及MnSOD表達(dá)的變化目的①觀察STZ誘導(dǎo)糖尿病大鼠眼部病變特點(diǎn)，糖尿病性白內(nèi)障、糖尿病性視網(wǎng)膜病變發(fā)生情況。②探討一種視網(wǎng)膜血管的三維檢查方法。③檢測正常大鼠視網(wǎng)膜中UCPs的表達(dá)類型，以及UCPs、MnSODmRNA表達(dá)隨糖尿病病程的變化，探討

5、糖尿病性視網(wǎng)膜病變發(fā)病的分子機(jī)制。方法①選取Sprague—Dawley(SD)大鼠，以STZ尾靜脈注射誘導(dǎo)建立糖尿病模型，利用現(xiàn)代的檢測手段如光學(xué)相干斷層掃描、眼底熒光血管造影，詳細(xì)觀察STZ誘導(dǎo)糖尿病大鼠眼部特點(diǎn)。②將大鼠深度麻醉后，行全身循環(huán)灌注，至眼球變蒼白，再灌注4％多聚甲醛作血管內(nèi)固定。取雙眼以4％多聚甲醛固定24h后，取出視網(wǎng)膜，改良視網(wǎng)膜血管消化鋪片方法，采用膠原酶消化制備視網(wǎng)膜血管鋪片，經(jīng)免疫熒光染色后采用激光掃描共聚