高鹽條件下耐鹽真菌的次生代謝產(chǎn)物研究.pdf

1、高鹽微生物是一類極端微生物,可生存在高鹽環(huán)境中。由于其生存環(huán)境的特殊性,可能具有獨特的次生代謝途徑,產(chǎn)生特有的次生代謝產(chǎn)物,是一類重要的天然產(chǎn)物研究資源。特別是將生物學與化學相結(jié)合,在生物學菌種分離純化,菌種鑒定以及發(fā)酵條件摸索的基礎上,利用化學手段對高鹽微生物次生代謝產(chǎn)物的化學多樣性進行研究,從高鹽微生物次生代謝產(chǎn)物中尋找抗腫瘤抗菌等活性的先導化合物。
　　 本論文從采自海南文昌清瀾紅樹林保護區(qū)和廣西山口紅樹林保護區(qū)的紅樹植物

2、的葉和根部樣品中獲得3株耐鹽天才真菌,從來源于海南臨高附近海域的蕾二岐燈芯柳珊瑚的篩選到1株耐鹽天才真菌;對這4株菌在鹽脅迫條件下產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物進行了系統(tǒng)研究,并就鹽脅迫對耐鹽天才真菌次生代謝產(chǎn)物化學多樣性的影響做了探討。
　　 研究內(nèi)容主要包括以下3個方面:
　　 1.耐鹽天才真菌的篩選。從來源于紅樹林高鹽環(huán)境的樣品中分離純化獲得133株耐鹽真菌。以P388腫瘤細胞增殖抑制、抑菌試驗作為生物活性篩選模型,TLC薄層

3、色譜和HPLC指紋圖譜作為化學篩選模型,采用生物活性和化學評價相結(jié)合的集成篩選模式,最終獲得3株耐鹽天才真菌。從來源于海南臨高附近海域的蕾二岐燈芯柳珊瑚的篩選到1株耐鹽天才真菌。
　　 2.鹽脅迫誘導下的4株耐鹽天才真菌次生代謝產(chǎn)物的研究。對耐鹽天才真菌進行發(fā)酵條件摸索,如培養(yǎng)基、發(fā)酵天數(shù)、鹽度等,選擇最佳培養(yǎng)條件進行大發(fā)酵,獲得發(fā)酵浸膏。通過薄層色譜、硅膠柱色譜、Sephadex LH-20柱色譜、反相高效液相色譜等分離方法,

4、從鹽脅迫誘導的4株耐鹽天才真菌次生代謝產(chǎn)物中,共分離得到78個單體化合物;應用波譜解析(UV,IR,NMR,MS,X-Ray等)和化學方法鑒定了72個單體化合物的化學結(jié)構(gòu)。其中新化合物23個:從耐鹽真菌赭曲霉Aspergillus ochraceus P-Z高鹽條件代謝產(chǎn)物中獲得了7個新的吡嗪酰胺類生物堿和線性四肽(3-9);從枝孢樣枝孢霉霉Cladosporiumcladosporioides PXP-49高鹽條件代謝產(chǎn)物中得到8個新

5、的不飽和脂肪酸(酯)類化合物(12-19):從產(chǎn)黃青霉Penicillium chrysogenum PXP-55高鹽條件代謝產(chǎn)物中得到5個新的神經(jīng)鞘胺醇糖苷類化合物(30-34)和2個新的2-吡啶酮類生物堿(35,36);從耐鹽真菌Wallemia sebi PXP-89高鹽條件代謝產(chǎn)物中得到1個新的吡啶生物堿(44)。已知化合物的結(jié)構(gòu)類型涉及苯的衍生物、脂肪酸類化合物、大環(huán)內(nèi)酯類、甾體類化合物、呋喃衍生物和環(huán)二肽類化合物等。運用體外

6、生物活性篩選模型,評價了新化合物的腫瘤細胞增殖抑制活性和抑菌活性。抑菌活性結(jié)果表明:吡嗪酰胺類和線性四肽類化合物4、8和9,神經(jīng)鞘胺醇糖苷類化合物31,吡啶衍生物44對產(chǎn)氣桿菌均具有抑制作用,MIC分別為40、20.1、18.9、1.72和76.7μM;化合物8對金黃色葡萄球菌具有抑制作用(MIC,98μM),且這些化合物均為含氮化合物。
　　 3.初步評價了鹵鹽脅迫對耐鹽真菌次生代謝產(chǎn)物化學多樣性的影響。使用對代謝產(chǎn)量、TLC