棉花黃萎菌拮抗枯草芽孢桿菌NCD-2抑菌物質的分離及性質分析.pdf

1、枯草芽孢桿菌NCD-2是從根際土壤中分離篩選到的一株對棉花黃萎病病原菌具有較強抑制作用的菌株，并對棉花黃萎病表現(xiàn)出較理想的防治效果。 通過對NCD-2菌株培養(yǎng)條件(培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時間和pH值)的研究，得到了抗菌物質產(chǎn)生的最佳條件為:在NB液體培養(yǎng)基中、30℃、pH=7、搖床培養(yǎng)(180rpm)2d，所得發(fā)酵液對棉花黃萎病菌的抑制作用最強。 通過對最佳條件下獲得的NCD-2菌株培養(yǎng)液進行硫酸銨沉淀(30％～80％)

2、，并用14000D透析袋透析獲得對棉花黃萎菌有抑制作用的蛋白粗提液。通過RNA酶，蛋白酶K和胰蛋白酶分別對該蛋白粗提液處理發(fā)現(xiàn)，經(jīng)RNA酶處理后蛋白液的抑菌活性與對照相比差異不顯著，經(jīng)蛋白酶K和胰蛋白酶處理后蛋白粗提液的抑菌活性與對照相比顯著降低；蛋白粗提液經(jīng)熱(60℃、80℃、100℃、120℃)處理30 min，結果表明經(jīng)60℃處理后的抑菌活性與對照相比差異不顯著，經(jīng)80℃、100℃、120℃處理后抑菌活性與對照相比顯著下降，但經(jīng)1

3、20℃處理30 min后仍有一部分抑菌活性。因此初步說明抑菌菌物質含有不耐熱蛋白類物質。 本文對30％～80％飽和硫酸銨沉淀的蛋白粗提液進行了進一步的研究，以確定抑菌物質的成分，即30％～80％硫酸銨沉淀的蛋白粗提液經(jīng)DEAE-Sepharose Fast Flow柱層析得到3個組分，其中第二組分有抑菌活性，該組分通過Sephacry S-100凝膠過濾分離得到3個組分S-1、S-2和S-3，其中S-1和S-3兩個組分經(jīng)活性檢測

4、為抑菌組分，經(jīng)RPC分析已達到分離純。 本文對小分子的脂肽類抑菌物質也進行了簡單的分析，以確定小分子脂肽類抑菌物質的成分，即濃鹽酸沉淀的脂肽類抗生素粗提液與標準品Surfactin、IturinA進行HPLC比較分析，結果表明NCD-2菌株的抑菌活性物質由多種成分構成，其中含有與IturinA相似的成分，進一步采用了ESI-MS對NCD-2菌株胞外抑菌物質粗提液與標準品Surfactin、IturinA進一步比較分析，發(fā)現(xiàn)NCD