枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)活性物質(zhì)的分離和功能測定.pdf

1、林果病害是一類重要的生物災(zāi)害，生物防治作為是林果病害管理中的一種有效持續(xù)控制方法，是現(xiàn)代林業(yè)重大生物災(zāi)害可持續(xù)控制系統(tǒng)中的重要組成部分。枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）是一種重要的生防內(nèi)生菌。本研究從石榴果實(shí)中分離獲得一株內(nèi)生菌-枯草芽孢桿菌sdau08-96菌株，研究結(jié)果表明該菌對多種林果病原菌有明顯的抑制作用。本研究通過對最佳發(fā)酵條件，抗菌物質(zhì)的理化性質(zhì)、分離純化及功能測定，初步探討了枯草芽孢桿菌sdau08-96

2、菌株生防機(jī)理，為該菌的開發(fā)利用提供依據(jù)，主要結(jié)果如下：
　　 1．產(chǎn)生抗菌物質(zhì)的最佳培養(yǎng)基為LB 培養(yǎng)基，裝液量為100/250mL，初始pH值為7.0、溫度28℃、接種量10％、培養(yǎng)時(shí)間72h和轉(zhuǎn)速200r/m 時(shí)菌體生長良好，產(chǎn)生的抗菌物質(zhì)較多，抑菌活性高。
　　 2．抗菌譜測定表明，sdau08-96菌株產(chǎn)生的抗菌蛋白和揮發(fā)性物質(zhì)對多種病原菌都有較強(qiáng)的抑制作用，菌絲形態(tài)的變化相差不多，主要表現(xiàn)為，菌絲分支增多，扭曲

3、，部分菌絲細(xì)胞出現(xiàn)斷裂和原生質(zhì)濃縮現(xiàn)象，菌絲頂端和中部細(xì)胞膨大成球形或橢圓形，部分菌絲變粗或纖細(xì)?？咕鞍纵^耐高溫、耐鹽、耐有機(jī)溶劑、耐酸堿性較好，揮發(fā)性物質(zhì)還可抑制病原菌菌絲色素產(chǎn)生的速度。
　　 3．抗菌蛋白的分離采用的方法為SDS-PAGE 電泳找出胞外目的蛋白條帶，切下條帶測序，比對結(jié)果顯示，胞外蛋白A條帶與枯草芽孢桿菌膜關(guān)聯(lián)的蛋白激酶的覆蓋率為19％，胞外蛋白B條帶與枯草芽孢桿菌脂蛋白的覆蓋率為25％，可以斷定A、B條

4、帶為目的蛋白條帶。
　　 4．揮發(fā)性物質(zhì)的分離純化采用頂空固相微萃取-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(HS-SPME-GC-MS）進(jìn)行，經(jīng)過GC-MS分析，揮發(fā)性活性物質(zhì)共有21種不同組分，這些物質(zhì)分屬于烷烴、醇、酸、酯、酚和醛等幾類物質(zhì)。
　　 5．揮發(fā)性活性物質(zhì)組分的功能測定結(jié)果表明，十五烷、二苯并呋喃、鄰苯二甲酸二乙酯、十四酸、2-丙烯酸十四烷酯和三聚乙醛6種物質(zhì)的抑菌作用比較高，其中，二苯并呋喃和三聚乙醛的抑菌率可以高達(dá)