竹黃有效成份的提取及其對(duì)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎TNF-α通路影響的探討.pdf

1、目的:應(yīng)用TNF-α誘導(dǎo)的小鼠成纖維細(xì)胞L929為模型,探索中藥竹黃治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的機(jī)制。重點(diǎn)研究竹黃提取物對(duì)模型細(xì)胞生長(zhǎng)和凋亡的影響,并從分子水平闡述竹黃提取物對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的L929細(xì)胞NF-κB蛋白的變化。通過(guò)上述研究,深入分析竹黃提取物對(duì)TNF-α信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響,分析竹黃治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的可能作用途徑。所獲結(jié)果可為臨床上竹黃治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎提供理論依據(jù),應(yīng)用細(xì)胞模型可以進(jìn)行相關(guān)藥物有效部位或成分的進(jìn)一步純化與分析,有

2、利于合理開(kāi)發(fā)和利用竹黃這一中藥資源。
　　 方法:(1)采用索氏提取法提取竹黃有效成分；(2)SRB法檢測(cè)經(jīng)竹黃提取物處理的TNF-α誘導(dǎo)的L929細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用的變化；形態(tài)學(xué)觀察不同濃度竹黃提取物處理對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的L929細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化；Hoechst染色和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同濃度的竹黃提取物對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的L929細(xì)胞的凋亡率的變化；Western blotting檢測(cè)不同濃度竹黃對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的L929細(xì)胞中NF

3、-κB P65蛋白的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:(1)得到深紅色藥膏,顏色反應(yīng)顯示含有苝醌類化合物；(2)竹黃提取物能改變TNF-α誘導(dǎo)的L929細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化；SRB試驗(yàn)結(jié)果顯示,竹黃提取物能夠降低TNF-α對(duì)L929細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用,并成濃度依賴性；Hocehst和流式細(xì)胞結(jié)果顯示竹黃提取物能降低TNF-α誘導(dǎo)的L929細(xì)胞的凋亡率,并成濃度依賴性；(3)竹黃提取物能降低TNF-α誘導(dǎo)的L929細(xì)胞的NF-κB p65蛋白的