成都地區(qū)犬布氏桿菌病血清學(xué)調(diào)查及Real-time PCR檢測(cè)方法的研究.pdf

1、犬布氏桿菌?。ê?jiǎn)稱(chēng)犬布?。┦侨腥静际蠗U菌后引起的一種傳染性疾病，在犬舍中極易流行傳播。我國(guó)近年來(lái)連續(xù)分離到犬種布氏桿菌，提示犬布病流行趨勢(shì)逐漸上升。隨著國(guó)內(nèi)飼養(yǎng)寵物犬的家庭日益增多，犬布病的預(yù)防與控制也應(yīng)得到更加密切的關(guān)注。本研究采用虎紅平板凝集試驗(yàn)（Rose Bengal Plate Test，RBPT）和試管凝集試驗(yàn)(Standard tube Agglutination Test, SAT)調(diào)查了成都市及周邊地區(qū)犬布病的流行情況

2、，并初步建立了實(shí)時(shí)熒光定量PCR.(Real-time PCR)快速檢測(cè)方法。
　　1.犬布氏桿菌病流行病學(xué)調(diào)查:本研究采集了成都市博愛(ài)動(dòng)物醫(yī)院門(mén)診犬、金堂犬場(chǎng)和流浪犬的血清，共計(jì)1010份，分別使用光滑型和粗糙型RBPT對(duì)所有臨床樣本進(jìn)行初步檢測(cè)，陽(yáng)性結(jié)果的血清再進(jìn)一步使用光滑型和粗糙型SAT進(jìn)行復(fù)檢。結(jié)果顯示，RBPT共檢測(cè)出33份陽(yáng)性血清，其中光滑型和粗糙型分別為14份和19份，光滑型和粗糙型RBPT陽(yáng)性率分別為1.39％和

3、1.88％，總RBPT陽(yáng)性率為3.27％; SAT共檢測(cè)出13份陽(yáng)性血清，其中光滑型和粗糙型分別為1份和12份，光滑型和粗糙型SAT陽(yáng)性率分別為0.10％和1.19％，總SAT陽(yáng)性率為1.29％。本研究結(jié)果表明，流浪犬的布氏桿菌病陽(yáng)性率最高，其次是犬場(chǎng)，而動(dòng)物醫(yī)院門(mén)診犬的陽(yáng)性率最低。
　　2.布氏桿菌病Real-time PCR檢測(cè)方法的建立:根據(jù)GenBank上提供的布氏桿菌屬高度保守基因bcsp31設(shè)計(jì)一對(duì)特異性引物，以犬種布

4、氏桿菌標(biāo)準(zhǔn)株RM6/66 bcsp31基因構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒pGM-T-bcsp31，并以此建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。引物特異性結(jié)果表明，8種布氏桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株基因組DNA均擴(kuò)增出198bp大小的片段，而對(duì)照菌株均呈陰性，說(shuō)明建立的方法特異性好。從犬布氏桿菌病Real-time PCR檢測(cè)方法的敏感性分析結(jié)果看出，普通PCR最低限度只能擴(kuò)增10-2數(shù)量級(jí)濃度的DNA，而本次建立的Real-timePCR方法最低限度能夠擴(kuò)增10-4數(shù)量級(jí)濃度的DNA樣本，靈