廣州地區(qū)61例苯丙酮尿癥患兒苯丙氨酸羥化酶基因突變分析.pdf

1、目的:
　　苯丙酮尿癥(phenylketonuria,PKU;OMIM 261600)是最常見的氨基酸代謝病之一,呈常染色體隱性遺傳疾病,世界各地都在研究PAH基因突變特點(diǎn),以明確PKU患者人群分布特征和地區(qū)分布特征,為PKU的診斷和治療提供幫助。因此,本研究應(yīng)用DNA直接測(cè)序的方法對(duì)PAH基因進(jìn)行突變分析,以了解廣州地區(qū)PAH基因突變類型及突變熱點(diǎn),有助于PKU患者的早期診斷和治療,為遺傳咨詢和產(chǎn)前診斷提供有力的理論依據(jù),進(jìn)一

2、步豐富中國(guó)人群PAH基因突變譜。
　　研究對(duì)象與方法:
　　1.研究對(duì)象:
　　選取2009年1月至2013年3月期間就診或轉(zhuǎn)診廣州市婦女兒童醫(yī)療中心新生兒篩查中心,Phe篩查陽(yáng)性病例61例。61例患兒中,對(duì)其中2例行家系分析。
　　2.方法:
　　1)實(shí)驗(yàn)方法在UCSC數(shù)據(jù)庫(kù)中提取基因組DNA序列,對(duì)PAH基因編碼的13個(gè)外顯子及外顯子-內(nèi)含子交界區(qū)設(shè)計(jì)相應(yīng)引物,并進(jìn)行PCR擴(kuò)增,然后運(yùn)用DNA測(cè)序技術(shù)對(duì)

3、PAH基因作序列分析。
　　2)序列分析采用Chromas軟件作序列分析,Clustalx軟件作序列比對(duì),參考PAHlocus數(shù)據(jù)庫(kù)(http://www.pahdb.mcgil1.ca)命名和定義新突變。
　　3)統(tǒng)計(jì)分析選擇兩獨(dú)立樣本的t-test,檢驗(yàn)水準(zhǔn)a=0.05,用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。
　　結(jié)果:
　　1、PAH基因突變檢出率在61例PKU患兒中,總的檢出率為89.34％(109/122

4、)。外顯子7突變檢出率35.8%(39/109)最高,其中突變頻率最高的3種突變分別為R243Q9.84%(12/109)、R241C9.02%(11/109)以及EX6-96A>G5.74%(7/109)。新突變的檢出率為9.83%(12/122)。
　　2、突變類型在61例PKU患兒中,共檢出53種不同的PAH基因突變,其中,錯(cuò)義突變35種,無(wú)義突變6種,剪接突變5種,缺失突變3種,沉默\剪接突變1種,插入突變1種,沉默突變1

5、種和缺失/插入1種。
　　3、檢出2個(gè)突變等位基因的49例,檢出3個(gè)突變等位基因的1例,檢出1個(gè)突變等位基因的8例,未檢出突變突變等位基因的3例。
　　4、新突變國(guó)際上首次發(fā)現(xiàn)的新突變12種,分別為S446G、F392I、F331S、L293S、H285R、Y154X、Q172H、F161fsX24、A246T、R158G、Y166X和H107R。
　　5、2個(gè)家系結(jié)果其中一個(gè)家系的風(fēng)險(xiǎn)胎兒(同卵雙胞胎)診斷為攜帶者,

6、遺傳來(lái)自母親的PAH基因突變;另一個(gè)家系父母均為PAH基因突變攜帶者,先證者和胎兒經(jīng)測(cè)序檢測(cè)均為PKU患者,突變分別來(lái)自父親和母的PAH基因突變。
　　結(jié)論:
　　1、獲得了廣州地區(qū)PAH基因突變譜,其中R243Q、R241C、EX6-96A>G為高頻突變,突變檢出率分別為9.84%、9.02%和5.74%。
　　2、外顯子7上PAH基因突變頻率最高。
　　3、發(fā)現(xiàn)12種中國(guó)人群PAH基因新突變,進(jìn)一步豐富了中國(guó)