炎性環(huán)境下熱休克蛋白27在人牙齦成纖維細(xì)胞損傷愈合中的表達(dá).pdf

1、目的：
　　本實驗將觀察熱休克蛋白27(Heat Shock Protein27，Hsp27)在白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)、脂多糖(LPS)和香煙提取物(CSE)誘導(dǎo)的人牙齦成纖維細(xì)胞(HGFs)損傷過程中的表達(dá)，重點在于觀察Hsp27與人牙齦組織損傷愈合是否存在相關(guān)性，為后期研究并揭示Hsp27在種植體周圍炎中的作用機制提供實驗基礎(chǔ)。
　　方法:
　　(1)人牙齦成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng);
　　(2)免疫組化鑒別

2、細(xì)胞來源;
　　(3) MTT確定最佳IL-1β、LPS和CSE的刺激濃度和刺激時間;
　　(4)通過單層細(xì)胞劃痕愈合實驗觀察各種刺激物對牙齦成纖維細(xì)胞的遷移能力;
　　(5)取第3代牙齦成纖維細(xì)胞接種于六孔板中，選用最佳濃度的IL-1β、LPS和CSE，刺激人牙齦成纖維細(xì)胞細(xì)胞，提取細(xì)胞總蛋白，western bolting檢測Hsp27的表達(dá)變化。
　　結(jié)果:
　　(1)免疫組化實驗結(jié)果顯示原代培養(yǎng)的細(xì)

3、胞抗角蛋白抗體陰性表達(dá)，抗波形絲蛋白抗體陽性表達(dá)，胞漿呈棕黃染色，胞核藍(lán)染。證明為中胚層組織來源而不是上皮來源，是人牙齦成纖維細(xì)胞的來源。
　　(2) IL-1β，LPS和CSE干預(yù)后，隨IL-1β，LPS和CSE刺激濃度的增高HGFs的遷移能力顯著降低。
　　(3) IL-1β干預(yù)后，HGFs中Hsp70，90表達(dá)量無明顯變化，Hsp27表達(dá)量顯著上調(diào)，并隨IL-1β刺激濃度的增高而增高的趨勢。
　　(4) Hsp2

4、7在正常HGFs中呈弱陽性表達(dá)，LPS干預(yù)后的HGFs中Hsp27呈強陽性表達(dá)，且隨刺激濃度的增高表達(dá)量有逐漸增高的趨勢。
　　(5) CSE干預(yù)后， Hsp27在HGFs中呈強陽性表達(dá)，且隨刺激濃度的增高表達(dá)量有逐漸增高的趨勢。
　　結(jié)論:
　　熱休克蛋白在IL-1β、LPS、CSE誘導(dǎo)的HGFs損傷過程中的表達(dá)情況不同，其中Hsp27在IL-1β、LPS、CSE介導(dǎo)的HGFs炎癥損傷中表達(dá)升高，且Hsp27表達(dá)量與