硬刺松潘裸鯉亞種與種的線粒體基因組、遺傳多樣性及其繁殖生物學(xué)的初步研究.pdf

1、硬刺松潘裸鯉（Gymnocypris potanini firmispinatus）為松潘裸鯉（G.potanini）指名亞種，均隸屬于鯉形目、鯉科、裂腹魚亞科、裸鯉屬，為我國(guó)特有種。2014年2月至2015年9月，在雅礱江一級(jí)支流安寧河和岷江上游分別采集到1244尾硬刺松潘裸鯉和13尾松潘裸鯉樣品，對(duì)2個(gè)物種的線粒體基因組(mtDNA)和遺傳多樣性進(jìn)行了分析，并初步研究了硬刺松潘裸鯉的繁殖生物學(xué)特征。主要研究結(jié)果如下:
　　1.

2、硬刺松潘裸鯉和松潘裸鯉mtDNA序列全長(zhǎng)分別為16680bp和16749bp，呈環(huán)狀，與已報(bào)道的裸鯉屬魚類相似。與已公布的大多數(shù)魚類mtDNA的組成與排列類似，硬刺松潘裸鯉和松潘裸鯉mtDNA包括13個(gè)蛋白質(zhì)編碼基因，22個(gè)tRNA基因，兩個(gè)rRNA基因和一個(gè)D-loop控制區(qū)。
　　硬刺松潘裸鯉和松潘裸鯉mtDNA分別編碼3790個(gè)和3800個(gè)氨基酸。除coⅠ起始密碼子為GTG外，其它基因起始密碼子均以ATG; coⅡ，nd4和

3、cytb以T為終止密碼子，其它各基因都均是以TAA或TAG為終止密碼子。
　　硬刺松潘裸鯉和松潘裸鯉mtDNA包括22個(gè)tRNA基因和2個(gè)rRNA基因。tRNA基因序列大小為68～76bp，呈典型的四葉式二級(jí)結(jié)構(gòu)，除松潘裸鯉tRNA-Phe比硬刺松潘裸鯉多1對(duì)GC堿基外，其它的tRNA二級(jí)結(jié)構(gòu)均完全相同。它們的rrnL基因大小均為1681bp，rrnL都在tRNA-Val和tRNA-LeuUUR之間;rrnS基因大小分別為957b

4、p和958bp，在tRNA-Phe和tRNA-Val之間。
　　基于線粒體DNA氨基酸序列構(gòu)建的ME、ML、NJ和UPGMA4種進(jìn)化樹分析表明，裸鯉屬魚類系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系較近，硬刺松潘裸鯉和松潘裸鯉聚為一支，有較近的親緣關(guān)系。
　　2.基于cytb、coⅠ基因和D-loop控制區(qū)的遺傳結(jié)構(gòu)及多樣性分析表明，安寧河5個(gè)硬刺松潘裸鯉群體和岷江2個(gè)松潘裸鯉群體基因A+T的平均含量均高于C+G含量，表現(xiàn)出明顯的反G偏倚。cytb、coⅠ

5、基因和D-loop控制區(qū)變異位點(diǎn)分別有43個(gè)、28個(gè)和18個(gè)，變異位點(diǎn)轉(zhuǎn)換率均大于顛換率。
　　所有群體中cytb、coⅠ基因和D-loop控制區(qū)分別發(fā)現(xiàn)21個(gè)、13個(gè)和6個(gè)單倍型，cytb基因單倍型數(shù)量最多?；赾ytb和coⅠ的序列分析表明，硬刺松潘裸鯉單倍型多樣性和核苷酸多樣性指數(shù)均高于松潘裸鯉，而基于D-loop控制區(qū)序列的單倍型多樣性和核苷酸多樣指數(shù)性則呈相反趨勢(shì)。
　　遺傳距離分析表明，硬刺松潘裸鯉和松潘裸鯉間的

6、遺傳距離大于各種內(nèi)群體間遺傳距離，但小于裸鯉屬種間的遺傳距離。同時(shí)，基于cytb、coⅠ基因和D-loop控制區(qū)系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系分析表明，硬刺松潘裸鯉和松潘裸鯉系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系較近，均能為硬刺松潘裸鯉是松潘裸鯉的亞種提供了證據(jù)。
　　3.安寧河硬刺松潘裸鯉樣品體長(zhǎng)范圍為3.6cm～18.8cm(7.86±1.52cm)，全長(zhǎng)(Total length，TL)與體重（Body weight，BW）呈顯著冪函數(shù)相關(guān)，關(guān)系式為:BW=0.002

7、5TL3.3943(n=1244);全長(zhǎng)與日齡(Daily age，D)呈線性相關(guān)，關(guān)系式為TL=0.7574+0.03184D(n=280);體重與日齡呈線性相關(guān)，關(guān)系式為BW=-0.03901+5.4383D(n=280)。
　　對(duì)7尾硬刺松潘裸鯉Ⅳ期卵巢統(tǒng)計(jì)分析表明，其絕對(duì)繁殖力為1224?！?656粒（1467.77±121.88粒），相對(duì)繁殖力為29.66粒/g～44.35粒/g（33.06±9.11粒/g）。對(duì)2014

8、年2月和4月性腺進(jìn)行組織切片，結(jié)果表明硬刺松潘裸鯉為卵巢Ⅲ期，Ⅰ期、Ⅱ期卵母細(xì)胞仍占有一定的比例;Ⅳ期卵巢，也存在Ⅲ期卵母細(xì)胞，由此推測(cè)其繁殖方式為分批同步產(chǎn)卵。
　　硬刺松潘裸鯉受精卵淡黃色、沉性、微粘性，卵徑為（3.01±0.24）mm。在水溫（12.4±0.7）℃的孵化條件下，胚胎期歷經(jīng)卵裂期、囊胚期、原腸胚期、神經(jīng)胚期、胚孔封閉期、器官形成期、出膜前期7個(gè)時(shí)期，歷時(shí)269.5h。初孵仔魚全長(zhǎng)（8.41±0.24）mm。出膜

9、后第15天（14.9±0.86℃）和18天（12.1±0.18℃）卵黃吸收完全。12.1±0.18℃培養(yǎng)條件下，硬刺松潘裸鯉仔魚卵黃吸收完全，背鰭、臀鰭和尾鰭的叉形分別出現(xiàn)于出膜后27天、40天和62天;經(jīng)過113天的培育，仔魚基本具備成魚的形態(tài)特征。
　　輪紋統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明，硬刺松潘裸鯉耳石幼魚輪紋沉積具有日周期性，即每日形成一輪日輪，結(jié)合野外樣品采集時(shí)間、微耳石日輪數(shù)據(jù)和石輪紋沉積規(guī)律推算，2月、4月和9月采集的硬刺松潘裸鯉幼魚