HDAC2在鼻息肉中的表達(dá)及在激素治療敏感性中的作用研究.pdf

1、目的:研究組蛋白去乙?；?(HDAC2)在鼻息肉組織中的表達(dá)以及鼻黏膜上皮細(xì)胞中HDAC2的表達(dá)對(duì)激素抗炎作用的影響。
　　方法:門診隨訪鼻內(nèi)鏡術(shù)后的鼻息肉患者，共收集成年鼻息肉患者28例，包括13例復(fù)發(fā)和15例未復(fù)發(fā)的患者。分別采用免疫組織化學(xué)方法（SP法）檢測HDAC2在復(fù)發(fā)鼻息肉患者、未復(fù)發(fā)鼻息肉患者以及11例正常中甲黏膜組織中的表達(dá)，并分析吸煙和HDAC2表達(dá)的關(guān)系。取正常中甲鼻黏膜，利用0.05％蛋白酶ⅪⅤ消化法分離上

2、皮細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)。在有/無丙酸氟替卡松(FluticasonePropionate)存在的情況下，利用IL-1β刺激鼻黏膜上皮細(xì)胞，24小時(shí)后收集細(xì)胞上清，利用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay ELISA)測定鼻黏膜上皮細(xì)胞分泌白細(xì)胞介素-6(IL-6)和白細(xì)胞介素（IL-8）的水平。再分別采用HDAC2抑制劑(TSA)+IL-1β和HDAC2特異性小干擾RNA(siRNA)+IL-

3、1β對(duì)鼻黏膜上皮細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)，用western blot檢測siRNA對(duì)HDAC2表達(dá)的干擾效率，采用ELISA法進(jìn)一步觀察不同刺激對(duì)激素調(diào)控鼻黏膜上皮細(xì)胞分泌細(xì)胞因子IL-6、8的影響。
　　結(jié)果:HDAC2在所有患者的鼻息肉組織和正常黏膜的上皮層和固有層均有表達(dá)。HDAC2在鼻息肉組織的黏膜上皮層和固有層表達(dá)均顯著低于正常黏膜的表達(dá)，而HDAC2在復(fù)發(fā)鼻息肉患者和未復(fù)發(fā)鼻息肉患者中的表達(dá)未見顯著性差異。吸煙對(duì)鼻息肉組織中HDA

4、C2的表達(dá)沒有影響。利用0.05％蛋白酶ⅪⅤ消化分離法能夠成功分離鼻黏膜上皮細(xì)胞，倒置顯微鏡下觀察見貼壁生長的鼻黏膜上皮細(xì)胞呈鋪路石樣形態(tài);細(xì)胞培養(yǎng)約8d后可進(jìn)行傳代培養(yǎng)，傳代培養(yǎng)2-3代的上皮細(xì)胞依然保持上皮細(xì)胞的形態(tài)和增殖特性。IL-1β刺激鼻黏膜上皮細(xì)胞24h后可激活上皮細(xì)胞，表現(xiàn)為上皮細(xì)胞分泌IL-6和IL-8水平顯著增高;梯度濃度丙酸氟替卡松(10-6-10-10M)可抑制IL-1β刺激鼻黏膜上皮細(xì)胞釋放IL-6和IL-8;T