膽脂瘤性中耳炎和慢性化膿性中耳炎患者細菌生物膜和胞內感染的觀察.pdf

1、目的：
　　觀察細菌生物膜在膽脂瘤性中耳炎(cholesteatoma otitis media,CHOM)和慢性化膿性中耳炎(chronic suppurative otitis media,CSOM)的形態(tài)特征和分布特點。探討細菌生物膜在CHOM和CSOM致病機制中的作用及臨床意義。
　　資料與方法：
　　1.病例收集:2010年11月至2011年5月在華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬協(xié)和醫(yī)院耳鼻喉科耳科組30例行開放式

2、乳突根治術的CHOM病例,和16例行鼓膜修補術的CSOM病例;1例外傷性面癱伴慢性化膿性中耳炎病例。收集術中切除的部分病變組織(如:膽脂瘤、病損聽小骨、病變黏膜、肉芽組織等)共106個標本為研究對象,進行實驗室檢查。
　　2.實驗方法:根據標本大小分別選用四種實驗方法:環(huán)境掃描電鏡(ESEM)觀察、死活菌染色-激光共聚焦顯微鏡(LIVE/DEAD-CLSM)觀察、常規(guī)石蠟切片蘇木素-伊紅(HE)染色和革蘭氏(Gram)染色熒光倒置

3、顯微鏡觀察研究。實驗采用雙盲法控制。
　　3.結果分析:依據細菌生物膜的判斷標準計算細菌生物膜的發(fā)現率,分析細菌生物膜在CHOM和CSOM的分布特點和臨床意義。制定CHOM分級評價表,初步分析CHOM和CSOM細菌生物膜的臨床影響因素。比較四種實驗方法的異同點。
　　結果：
　　1.30例CHOM病人細菌生物膜的發(fā)現率為83.3％(25/30例);胞內細菌生物膜樣豆莢結構的發(fā)現率為20%(6/30例);其中掃描電鏡細菌

4、生物膜的發(fā)現率是77.8%(7/9例);16例CSOM病人標本都是用LIVE/DEAD-CLSM方法檢測細菌生物膜,細菌生物膜的發(fā)現率為75%(12/16例),胞內細菌生物膜樣豆莢結構的發(fā)現率為12.5%(2/16例)。
　　2.檢測到的細菌生物膜以小片狀分布為主,其組成中有多種直徑不同的細菌,以球菌為主;并發(fā)現多種細菌共存于細菌生物膜中。
　　3.在細菌生物膜感染狀態(tài)下,中耳黏膜上皮組織病理改變表現為:細胞水腫、結構分界不

5、清、纖毛破壞、細胞壞死等。
　　4.膽脂瘤的表面和內部均發(fā)現細菌生物膜。
　　5.CHOM患者細菌生物膜的檢出率與中耳標本取材部位(乳突鼓竇區(qū)、鼓竇入口區(qū)、鼓室區(qū))有關(P<0.05);乳突鼓竇區(qū)和鼓竇入口區(qū)比鼓室區(qū)的標本細菌生物膜發(fā)現率高且濃密。
　　6.細菌生物膜發(fā)現率與CHOM、SCOM的病程、干耳時間、術前用藥、性別、病情分級等無相關性(P>0.05)。
　　7.四種方法都成功檢測到細菌生物膜;ESEM和

6、LIVE/DEAD-CLSM方法檢測到的細菌和細菌生物膜的大小一致,細菌生物膜發(fā)現率最接近、分布也一致。
　　結論：
　　1.CHOM和CSOM的中耳病變組織存在有細菌生物膜和胞內細菌生物膜樣豆莢結構。膽脂瘤內部和表面均發(fā)現細菌生物膜,提示術中不應保留膽脂瘤等不可逆病變組織。
　　2.中耳病變標本中的細菌生物膜以小片狀分布為主,有多種細菌以球菌為主;細菌生物膜內檢測到多種細菌。
　　3.細菌生物膜的發(fā)現率與CHO