膽脂瘤性中耳炎和慢性化膿性中耳炎患者細(xì)菌生物膜和胞內(nèi)感染的觀察.pdf

1、目的：
　　觀察細(xì)菌生物膜在膽脂瘤性中耳炎(cholesteatoma otitis media,CHOM)和慢性化膿性中耳炎(chronic suppurative otitis media,CSOM)的形態(tài)特征和分布特點(diǎn)。探討細(xì)菌生物膜在CHOM和CSOM致病機(jī)制中的作用及臨床意義。
　　資料與方法：
　　1.病例收集:2010年11月至2011年5月在華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院耳鼻喉科耳科組30例行開(kāi)放式

2、乳突根治術(shù)的CHOM病例,和16例行鼓膜修補(bǔ)術(shù)的CSOM病例;1例外傷性面癱伴慢性化膿性中耳炎病例。收集術(shù)中切除的部分病變組織(如:膽脂瘤、病損聽(tīng)小骨、病變黏膜、肉芽組織等)共106個(gè)標(biāo)本為研究對(duì)象,進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢查。
　　2.實(shí)驗(yàn)方法:根據(jù)標(biāo)本大小分別選用四種實(shí)驗(yàn)方法:環(huán)境掃描電鏡(ESEM)觀察、死活菌染色-激光共聚焦顯微鏡(LIVE/DEAD-CLSM)觀察、常規(guī)石蠟切片蘇木素-伊紅(HE)染色和革蘭氏(Gram)染色熒光倒置

3、顯微鏡觀察研究。實(shí)驗(yàn)采用雙盲法控制。
　　3.結(jié)果分析:依據(jù)細(xì)菌生物膜的判斷標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算細(xì)菌生物膜的發(fā)現(xiàn)率,分析細(xì)菌生物膜在CHOM和CSOM的分布特點(diǎn)和臨床意義。制定CHOM分級(jí)評(píng)價(jià)表,初步分析CHOM和CSOM細(xì)菌生物膜的臨床影響因素。比較四種實(shí)驗(yàn)方法的異同點(diǎn)。
　　結(jié)果：
　　1.30例CHOM病人細(xì)菌生物膜的發(fā)現(xiàn)率為83.3％(25/30例);胞內(nèi)細(xì)菌生物膜樣豆莢結(jié)構(gòu)的發(fā)現(xiàn)率為20%(6/30例);其中掃描電鏡細(xì)菌

4、生物膜的發(fā)現(xiàn)率是77.8%(7/9例);16例CSOM病人標(biāo)本都是用LIVE/DEAD-CLSM方法檢測(cè)細(xì)菌生物膜,細(xì)菌生物膜的發(fā)現(xiàn)率為75%(12/16例),胞內(nèi)細(xì)菌生物膜樣豆莢結(jié)構(gòu)的發(fā)現(xiàn)率為12.5%(2/16例)。
　　2.檢測(cè)到的細(xì)菌生物膜以小片狀分布為主,其組成中有多種直徑不同的細(xì)菌,以球菌為主;并發(fā)現(xiàn)多種細(xì)菌共存于細(xì)菌生物膜中。
　　3.在細(xì)菌生物膜感染狀態(tài)下,中耳黏膜上皮組織病理改變表現(xiàn)為:細(xì)胞水腫、結(jié)構(gòu)分界不

5、清、纖毛破壞、細(xì)胞壞死等。
　　4.膽脂瘤的表面和內(nèi)部均發(fā)現(xiàn)細(xì)菌生物膜。
　　5.CHOM患者細(xì)菌生物膜的檢出率與中耳標(biāo)本取材部位(乳突鼓竇區(qū)、鼓竇入口區(qū)、鼓室區(qū))有關(guān)(P<0.05);乳突鼓竇區(qū)和鼓竇入口區(qū)比鼓室區(qū)的標(biāo)本細(xì)菌生物膜發(fā)現(xiàn)率高且濃密。
　　6.細(xì)菌生物膜發(fā)現(xiàn)率與CHOM、SCOM的病程、干耳時(shí)間、術(shù)前用藥、性別、病情分級(jí)等無(wú)相關(guān)性(P>0.05)。
　　7.四種方法都成功檢測(cè)到細(xì)菌生物膜;ESEM和

6、LIVE/DEAD-CLSM方法檢測(cè)到的細(xì)菌和細(xì)菌生物膜的大小一致,細(xì)菌生物膜發(fā)現(xiàn)率最接近、分布也一致。
　　結(jié)論：
　　1.CHOM和CSOM的中耳病變組織存在有細(xì)菌生物膜和胞內(nèi)細(xì)菌生物膜樣豆莢結(jié)構(gòu)。膽脂瘤內(nèi)部和表面均發(fā)現(xiàn)細(xì)菌生物膜,提示術(shù)中不應(yīng)保留膽脂瘤等不可逆病變組織。
　　2.中耳病變標(biāo)本中的細(xì)菌生物膜以小片狀分布為主,有多種細(xì)菌以球菌為主;細(xì)菌生物膜內(nèi)檢測(cè)到多種細(xì)菌。
　　3.細(xì)菌生物膜的發(fā)現(xiàn)率與CHO