抗原特異性CTL在慢性乙型肝炎肝損傷和病毒清除中的作用.pdf

1、乙型肝炎病毒(HepatitisBvirus，HBV)是非直接致細(xì)胞病變病毒，可導(dǎo)致慢性肝炎、肝硬化和原發(fā)性肝癌。乙型肝炎的發(fā)病機(jī)理，主要是HBV感染后機(jī)體在清除HBV同時(shí)引起肝細(xì)胞損傷的一種免疫病理反應(yīng)，細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CytotoxicTLymphocytes，CTL)在病毒清除和肝細(xì)胞損傷中可能起關(guān)鍵的作用。HBV感染肝細(xì)胞后，病毒抗原被抗原提呈細(xì)胞(antigenpresentingcell，APC)的蛋白酶裂解成小分子的寡

2、肽，并與肝細(xì)胞內(nèi)人白細(xì)胞Ⅰ類抗原(HumanLeukocyteAntigen-Ⅰ，HLA-Ⅰ)分子結(jié)合成復(fù)合物，表達(dá)于細(xì)胞表面，成為T細(xì)胞表位。CTL通過表面的CD8+分子與HLA-Ⅰ類分子產(chǎn)生粘附，并由T細(xì)胞抗原受體(Tcellantigenreceptor，TCR)識別上述寡肽表位，此類CTL即為HBV抗原特異性CTL。目前已鑒定出多個(gè)受HLA-Ⅰ類分子限制的HBV不同抗原區(qū)段的CTL表位，如核心區(qū)(corel8-27)、聚合酶區(qū)(

3、polymerase575-583)及包膜區(qū)(envelope335-343)等表位。目前認(rèn)為抗原特異性CTL作用的機(jī)制可能為先識別HBV感染肝細(xì)胞表面相應(yīng)的表位，然后發(fā)揮以下兩種抗病毒作用：其一是直接殺傷部分HBV感染肝細(xì)胞，在清除病毒的同時(shí)也導(dǎo)致肝細(xì)胞的裂解；其二是分泌內(nèi)源性γ干擾素(γ-interferon，γ-IFN)等細(xì)胞因子，后者通過非溶細(xì)胞的機(jī)制清除肝細(xì)胞中的病毒。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，急性乙型肝炎(acutehepatitis

4、B，AHB)體內(nèi)存在多特異性的和多克隆的CTL，能識別多個(gè)抗原表位，識別范圍廣，應(yīng)答作用強(qiáng)。而慢性乙型肝炎(chronichepatitisB，CHB)患者體內(nèi)的特異性CTL卻很少，特異性CTL只能識別單一的抗原位點(diǎn)，應(yīng)答范圍窄而且能力弱，可能與清除病毒能力不足而導(dǎo)致慢性化有關(guān)。但CHB病情急性加重時(shí)可以檢測到CTL細(xì)胞相應(yīng)增加，同時(shí)常伴隨有血清HBVDNA的波動和HBeAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換(HBeAg→抗-HBe)，并且可能獲得控制病毒的效

5、果。有研究認(rèn)為CHB病情急性加重可能是受HLA-Ⅰ限制的針對HBV抗原的CTL作用的結(jié)果，免疫反應(yīng)是CHB病情急性加重的主要原因。但由于CHB患者體內(nèi)的特異性CTL很少及檢測手段的限制，抗原表位特異性CTL在CHB急性發(fā)作及發(fā)展為肝功能衰竭中的作用尚不清楚。 近年抗原特異性CTL檢測技術(shù)有了較大的進(jìn)展，出現(xiàn)了更為特異、敏感和快速的檢測技術(shù)，如可溶性-組織相容性復(fù)合物(Majorhistocompatibilitycomplex，

6、MHC)肽四聚體(Tetramers)法，該方法結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)可直接檢測外周血或者肝組織內(nèi)特異性CD8+T細(xì)胞數(shù)量，避免了體外培養(yǎng)技術(shù)存在的諸多外界條件影響因素，更真實(shí)地反映了體內(nèi)特異性CD8+T細(xì)胞的實(shí)際情況。另由于CHB特異性CTL只能識別較單一的抗原位點(diǎn)，有研究證實(shí)主要是識別HBV核心區(qū)(core18-27)表位，故我們選擇檢測針對HBV核心區(qū)(core18-27)表位的抗原特異性CTL。因此，本研究采用Tetramers法基礎(chǔ)上

7、進(jìn)一步改良的MHC五聚體法(Pro5TMMHCPentamers)結(jié)合流式細(xì)胞技術(shù)檢測CHB患者體內(nèi)的核心抗原表位特異性CTL細(xì)胞，試圖闡明抗原表位特異性CTL細(xì)胞在CHB肝損傷和病毒清除中的作用及病情急性加重的免疫發(fā)病機(jī)制，為新的抗病毒治療手段，如治療性疫苗、免疫活性細(xì)胞過繼治療等提供理論基礎(chǔ)和評價(jià)方法。 本課題研究：①采用MHC五聚體法結(jié)合流式細(xì)胞技術(shù)檢測CHB患者外周血抗原特異性CTL細(xì)胞，并分析其與肝損害和病毒載量的關(guān)系