干細胞關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子Oct4在人膀胱移行細胞癌中的表達及對人膀胱癌EJ細胞生物學(xué)的影響.pdf

1、目的：觀察干細胞關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子Oct4在膀胱移行細胞癌中的表達，并探討Oct4基因沉默對人膀胱癌EJ細胞生物學(xué)的影響，探討Oct4基因作為膀胱癌基因治療靶點的可行性和有效性。
　　 方法：
　　 分別用免疫組化和實時定量RT-PCR檢測74例膀胱癌組織和32例癌旁組織及24例正常膀胱組織病理標(biāo)本中的Oct4表達；并將人膀胱癌EJ細胞，常規(guī)分為空白對照組、陰性對照組和實驗轉(zhuǎn)染組進行實驗。體外化學(xué)合成Oct4基因序列特異性小干

2、擾RNA(siRNA)，脂質(zhì)體Lipofectamine 2000 介導(dǎo)轉(zhuǎn)染人膀胱癌細胞株EJ細胞；采用RT-PCR和Western印跡方法分別檢測特異性siRNA 對Oct4基因在mRNA和蛋白水平上沉默效果；轉(zhuǎn)染后采用MTT 法檢測siRNA 對細胞增殖的作用；AO/EB 熒光染色法檢測其凋亡情況；用細胞劃痕和Transwell 試驗體外檢測細胞遷移和侵襲能力。
　　 結(jié)果：
　　 免疫組化顯示Oct4在膀胱癌組織的

3、表達明顯高于癌旁組織和正常膀胱組織，陽性表達率分別為83.78％、21.87％、0％，各組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，Oct4在膀胱癌不同病理分級中的陽性表達率分別為G1組66.67％、G2組87.50％、G3組 100％，在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和非淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的陽性表達率為92.3％，79.1％，隨著病理分級的升高和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的出現(xiàn),Oct4表達水平逐漸升高，各組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，但不同分期的膀胱癌組織中Oct4表達差

4、異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；實時定量RT-PCR結(jié)果顯示Oct4在膀胱癌組織中的表達是癌旁組織的的2.0倍，是正常膀胱組織的3.41倍，各組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，但不同分期的膀胱癌組織中Oct4表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；成功轉(zhuǎn)染Oct4-siRNA的膀胱癌EJ細胞,RT-PCR及Western blot分別顯示Oct4mRNA和蛋白表達在相應(yīng)的癌細胞中明顯下降；與陰性對照組比較，細胞增殖明顯抑制(P<0.05

5、)；同時細胞凋亡率增加（52.73％比11.7％）；RNA 干擾組明顯抑制EJ細胞遷移力和侵襲力(15.34±1.85比63.07±1.73)。
　　 結(jié)論：
　　 Oct4的表達與膀胱癌的分級和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)但與臨床分期無關(guān)，Oct4的過高表達可能在膀胱癌的發(fā)生發(fā)展中起重要作用；Oct4-siRNA 可以有效地抑制膀胱癌EJ細胞Oct4基因的表達，從而抑制腫瘤細胞增殖，促進細胞凋亡，抑制細胞遷移和侵襲，Oct4-s