瀉劑結(jié)腸大鼠回腸和橫結(jié)腸VIP、腸嗜鉻細(xì)胞損害的可復(fù)性研究.pdf

1、目的：本研究課題在大鼠瀉劑結(jié)腸模型建立后，進(jìn)行恢復(fù)性飼養(yǎng)，通過(guò)觀察大鼠回腸和橫結(jié)腸5-HT免疫反應(yīng)陽(yáng)性的腸嗜鉻細(xì)胞密度變化以及VIP免疫反應(yīng)性變化，探討腸嗜鉻細(xì)胞、VIP神經(jīng)元在停用瀉劑后的恢復(fù)情況，了解腸神經(jīng)系統(tǒng)損傷后的可逆轉(zhuǎn)性，為臨床工作提供理論依據(jù)。 方法： 1.動(dòng)物分組：選取健康Wistar大鼠120只，雌雄各半，按照完全隨機(jī)的方法進(jìn)行分組，實(shí)驗(yàn)組80只，隨機(jī)分為便秘組一與便秘組二各40只，對(duì)照組40只，分組后各

2、組間體重、性別無(wú)顯著性差異。 2.動(dòng)物處理：便秘組一與便秘組二采用大黃浸液灌胃，首日劑量為800mg/kg(生粉)，此后每日劑量在前一日基礎(chǔ)上增加200mg/kg(生粉)，直至實(shí)驗(yàn)組出現(xiàn)半數(shù)大鼠糞便變稀，保持劑量至80％的稀便消失，繼續(xù)加量給藥，至又有半數(shù)大鼠糞便變稀，如此程序循環(huán)3次，待實(shí)驗(yàn)組第三次80％的稀便消失一周后停止建模，便秘組一繼續(xù)以維持量大黃灌胃，便秘組二以同等體積蒸餾水灌胃恢復(fù)飼養(yǎng)，時(shí)間為1個(gè)月。對(duì)照組從實(shí)驗(yàn)開(kāi)始

3、以同等體積蒸餾水灌胃飼養(yǎng)。 3.取材及標(biāo)本處理：恢復(fù)性飼養(yǎng)1個(gè)月后選取便秘組一、便秘組二、對(duì)照組大鼠各20只，分別切取距回盲瓣5cm處回腸及橫結(jié)腸標(biāo)本，進(jìn)行HE染色、腸嗜鉻細(xì)胞、VIP免疫組化染色，光鏡下觀察結(jié)腸壁的變化，腸嗜鉻細(xì)胞數(shù)量及形態(tài)變化，對(duì)VIP免疫組織化學(xué)染色行半定量分析及圖像分析。 4.統(tǒng)計(jì)分析：數(shù)據(jù)采用SAS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理分析，對(duì)所測(cè)定結(jié)果進(jìn)行正態(tài)性及方差齊性檢驗(yàn)，組間比較采用單因素方差分析檢驗(yàn)，有差

4、別者用q檢驗(yàn)進(jìn)一步兩兩比較，結(jié)腸肌間神經(jīng)叢VIP陽(yáng)性神經(jīng)元免疫組織化學(xué)染色半定量結(jié)果，選用多個(gè)樣本比較的秩和檢驗(yàn)(Kruskal-wallis法)及多個(gè)樣本兩兩比較的秩和檢驗(yàn)(Nemenyi法)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。 結(jié)果： 1.腸道大體病理變化及HE染色：三組大鼠腸道外觀無(wú)明顯差別，結(jié)腸粘膜無(wú)色素沉著。對(duì)照組大鼠腸道切片HE染色未發(fā)現(xiàn)病變，便秘組一大鼠腸道切片HE染色可見(jiàn)明顯粘膜慢性炎癥改變。便秘組二可見(jiàn)粘膜慢性炎癥

5、改變，較便秘組一減輕。 2.腸嗜鉻細(xì)胞染色：便秘組一、便秘組二及對(duì)照組大鼠腸道所有切片的粘膜層中均可見(jiàn)5-HT免疫反應(yīng)陽(yáng)性的腸嗜鉻細(xì)胞，胞質(zhì)和胞突中有棕色或棕黑色顆粒，核呈藍(lán)色，背景呈淡黃色，對(duì)比鮮明，5-HT免疫反應(yīng)陽(yáng)性的腸嗜鉻細(xì)胞形態(tài)多樣，如錐形、梭形、圓形、橢圓形、桿形等。便秘組一大鼠腸道5-HT免疫反應(yīng)陽(yáng)性的腸嗜鉻細(xì)胞密度高于對(duì)照組。便秘組二大鼠腸道5-HT免疫反應(yīng)陽(yáng)性的腸嗜鉻細(xì)胞密度低于便秘組一但高于對(duì)照組。

6、3.VIP染色：光鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，正常大鼠結(jié)腸肌問(wèn)神經(jīng)叢內(nèi)VIP神經(jīng)纖維呈“網(wǎng)狀”分布，其神經(jīng)節(jié)粗大，陽(yáng)性神經(jīng)元密集分布，胞體較大，節(jié)間束較粗，束內(nèi)神經(jīng)纖維分布密集，可見(jiàn)散在分布的陽(yáng)性神經(jīng)元。與對(duì)照組大鼠相比，便秘組大鼠結(jié)腸肌間神經(jīng)叢VIP陽(yáng)性神經(jīng)節(jié)及節(jié)間束細(xì)小，節(jié)內(nèi)神經(jīng)元數(shù)量明顯減少，節(jié)間束內(nèi)神經(jīng)纖維分布稀疏，陽(yáng)性神經(jīng)元胞體少見(jiàn)。圖像分析顯示，便秘組一大鼠結(jié)腸肌間神經(jīng)叢內(nèi)VIP陽(yáng)性神經(jīng)元面密度明顯低于對(duì)照組大鼠。便秘組二大鼠腸肌間神經(jīng)叢