聚酰胺—胺型樹狀大分子的合成及性能研究.pdf

1、樹狀大分子(dendrimers)是二十世紀(jì)后期出現(xiàn)的一類新型的合成大分子。這類大分子在結(jié)構(gòu)上具有球形、高度分枝、單分散性等特點。由于其結(jié)構(gòu)的特殊性，使樹狀大分子在生物領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用。特別是其作為基因載體的研究引起了人們的巨大興趣。聚酰胺-胺(polyamidoamine，PAMAM)樹狀大分子是最先得到深入研究并且引起廣泛關(guān)注的樹狀大分子。本文研究的目的是探討樹狀大分子的合成、修飾，并且將所合成的樹狀大分子包裹量子點應(yīng)用于生物熒光

2、探針，以及與PLGA復(fù)合制備納米基因載體方面的研究。研究結(jié)果主要包括：
　　 ⑴PAMAM 樹狀大分子的合成與修飾運用重復(fù)交替的兩步反應(yīng)合成PAMAM樹狀大分子：先在樹狀大分子末端伯胺進行Michael加成反應(yīng)，再在樹狀大分子末端酯基進行酰胺化反應(yīng)。利用甲醇和乙酸乙酯混合溶劑作為淋洗劑對半代的樹狀大分子進行柱層析分離，合成了從-0.5G-4.0G的PAMAM樹狀大分子。并且考察了樹狀大分子自身的熒光性能。為了增加樹狀大分子在基因

3、轉(zhuǎn)染過程中過膜能力，提高轉(zhuǎn)染效率，在樹狀大分子的外圍修飾不同取代度的疏水的十八碳酰，從而得到外圍帶有疏水長鏈的3.0 G PAMAM。
　　 ⑵PAMAM 樹狀大分子與量子點的作用采用溶劑揮發(fā)法，制備了由表面活性劑和樹狀大分子包裹的水溶性核殼型CdSe/ZnS量子點熒光納米顆粒。通過透射電子顯微鏡(TEM)和熒光顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，得到的水溶性量子點依然保持著原有量子點的熒光特性，并且顆粒大小均勻(100-150 nm)，分散性好，

4、可以用來標(biāo)記HeLa 細(xì)胞。
　　 ⑶樹狀大分子與PLGA的作用采用溶劑擴散法制備了樹狀大分子PAMAM復(fù)合PLGA 納米分散液。在制備過程中，選擇合適的內(nèi)、外相體積是制備納米粒的關(guān)鍵所在。并且通過對納米粒的的zeta電位、臨界聚沉值以及pH 穩(wěn)定性的測量，可知在水相:有機相=12:1，表面活性劑濃度為1[％]時，可以得到粒徑為149.7 nm的納米分散液。在pH 值7～9 范圍內(nèi)，納米粒可以穩(wěn)定存在，不發(fā)生團聚。
　　

5、 ⑷PAMAM-PLGA納米粒對基因的轉(zhuǎn)染采用綠色熒光蛋白質(zhì)基因作為模型基因藥物，制備不同N/P 比的PAMAM-PLGA-DNA 納米粒并評價其轉(zhuǎn)染性能。瓊脂糖凝膠電泳阻滯實驗結(jié)果表明，在N/P＞3:1 起，DNA 所帶負(fù)電荷全部被中和，從而全部被阻滯在加樣孔中。體外基因轉(zhuǎn)染實驗表明，納米粒能夠?qū)①|(zhì)粒Pvivo 2轉(zhuǎn)染至細(xì)胞內(nèi)，轉(zhuǎn)染效率比單純用3.0G PAMAM 載體要高，表明復(fù)合基因載體可以提高轉(zhuǎn)染效率。
　　 本文雖然考