原發(fā)性肝細(xì)胞癌患者外周血中MHBst基因突變及其意義研究.pdf

1、目的:對乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)相關(guān)性肝細(xì)胞癌（Hepatocellular carcinoma，HCC）、HBV相關(guān)性肝硬化（HBV-related liver cirrhosis，HBC）和慢性乙型肝炎（Chronic hepatitis B，CHB）患者外周血中乙肝病毒羧基末端截短型中蛋白（Truncated middle surface protein，MHBst）基因進(jìn)行突變篩查，明確相應(yīng)患者

2、外周血中是否存在MHBst基因突變及其突變類型，探討MHBst基因突變在HBV相關(guān)性HCC發(fā)生和發(fā)展過程中可能的作用機制及其意義，并構(gòu)建一種簡易方法檢測新型MHBst基因突變。
　　方法:分別提取96例HBV相關(guān)性HCC患者、40例HBC和51例CHB患者的血清HBV基因組DNA，PCR法擴增preS2/S基因片段，將擴增出的片段送公司測序，檢測是否存在MHBst基因突變及其突變類型；比較HCC組與非HCC組（HBC、CHB）外周

3、血中MHBst基因突變率；比較原發(fā)性肝細(xì)胞癌患者外周血MHBst基因狀態(tài)與患者臨床病理指標(biāo)及腫瘤組織中核因子-κB（Nuclear factor-kappa B，NF-κB）表達(dá)之間的關(guān)系；最后通過構(gòu)建TaqMan-MGB探針法(TaqMan-MGB probe-based real-time fluorescentquantitative PCR)檢測新發(fā)現(xiàn)的MHBst基因突變。
　　結(jié)果:1.在187例血清標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)2種MHB

4、st基因突變，都為點突變，這2種突變分別為MHBst78（G>T）和MHBst165（C>A），其中MHBst78（G>T）既往報道過，而 MHBst165（C>A）為新發(fā)現(xiàn)類型；2.HCC患者外周血中MHBst基因突變率為57.3％（55/96）較非HCC組（HBC、CHB）外周血中MHBst基因突變率為40.7%（37/91）明顯增高（P＝0.023）；MHBst基因狀態(tài)與患者年齡、性別、甲胎蛋白、脈管侵犯、腫瘤大小、腫瘤分化均無關(guān)

5、（P＞0.05）；外周血中存在MHBst基因突變的HCC患者較外周血中無MHBst基因突變的HCC患者腫瘤組織中NF-κB表達(dá)量明顯增高（P＝0.035）；3.通過構(gòu)建TaqMan-MGB探針法可有效檢測出標(biāo)本中的MHBst165（C>A）突變。
　　結(jié)論:1.本研究新發(fā)現(xiàn)一種MHBst基因突變類型MHBst165（C>A）；2.HCC患者體內(nèi)存在較高的乙肝病毒MHBst基因突變率，MHBst在HCC患者體內(nèi)可能是通過上調(diào)NF-κ