白血病抑制因子在大鼠急性和慢性青光眼模型視網(wǎng)膜中的表達(dá)和意義研究.pdf

1、目的：研究白血病抑制因子(Leukemiainhibitionfactor，LIF)及其相關(guān)信號(hào)通路分子在急性和慢性高眼壓大鼠視網(wǎng)膜中表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化，并初步探討其意義。
　　方法：1.健康SD大鼠以前房灌注正常生理鹽水的方法使眼壓升高至70mmHg，維持1h。右眼作為正常對(duì)照。回復(fù)正常眼壓后12h、24h、2d、3d和7d處死動(dòng)物。
　　2.健康SD大鼠燒灼鞏膜上靜脈建立慢性高眼壓模型，眼壓升高后3d、1w、2w、3w、4w

2、處死動(dòng)物。分別取上述模型動(dòng)物的視網(wǎng)膜組織行TUNEL染色檢測(cè)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡，以HE染色檢測(cè)視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)變化，透射電子顯微鏡下觀察視網(wǎng)膜組織。取視網(wǎng)膜組織提取總蛋白及總RNA，以Westernblot法檢測(cè)視網(wǎng)膜中LIF、LIF-receptor(LIFR)及LIF下游信號(hào)通路分子signaltransducersandtranscriptionactivators3(STAT3)、磷酸化STAT3(P-STAT3)、serine

3、-threoninekinase(Akt)、磷酸化Akt(P-Akt)、extracellularregulatedproteinkinases(ERK)和磷酸化ERK(P-ERK)蛋白表達(dá)水平，以Real-timePCR檢測(cè)LIF和LIFRmRNA表達(dá)水平。
　　結(jié)果：1.與正常對(duì)照相比，HE染色結(jié)果顯示隨著時(shí)間延長(zhǎng)，急性高眼壓組視網(wǎng)膜內(nèi)叢狀層及內(nèi)核層變薄，視神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量逐漸減少;TUNEL染色結(jié)果顯示急性高眼壓組細(xì)胞凋亡數(shù)量

4、顯著增加，急性高眼壓后24h細(xì)胞凋亡數(shù)量最多。透射電鏡結(jié)果顯示再灌注后12h及3d，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞發(fā)生凋亡晚期表現(xiàn)，染色質(zhì)濃縮、邊集，線粒體空泡化，發(fā)生明顯腫脹，再灌注后12h凋亡細(xì)胞數(shù)量明顯多于再灌注后3d。與正常對(duì)照相比，急性高眼壓組LIF蛋白表達(dá)上調(diào)，急性高眼壓后12h表達(dá)水平最高;LIFR蛋白表達(dá)水平于各時(shí)間點(diǎn)均高于正常對(duì)照組，且隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸升高。LIFmRNA表達(dá)水平上調(diào)，急性高眼壓后12h表達(dá)最高;LIFRmRNA在急性

5、高眼壓后表達(dá)上調(diào)，3d時(shí)表達(dá)水平最高。下游信號(hào)通路分子蛋白STAT3、Akt及其磷酸化形式P-STAT3、P-Akt表達(dá)均高于對(duì)照組。急性高眼壓組ERK表達(dá)無明顯變化，P-ERK表達(dá)下調(diào)。
　　2.與正常對(duì)照相比，HE染色結(jié)果顯示慢性高眼壓后視網(wǎng)膜內(nèi)叢狀層、外核層明顯變薄，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞減少，細(xì)胞核大小不一，慢性高眼壓后4w視網(wǎng)膜神經(jīng)纖維層變薄。TUNEL染色結(jié)果顯示慢性高眼壓組細(xì)胞凋亡數(shù)量明顯增多。慢性高眼壓后LIF蛋白表達(dá)上調(diào)，慢

6、性高眼壓后2w表達(dá)最高;LIFR蛋白表達(dá)水平高于正常對(duì)照組，慢性高眼壓后4w表達(dá)最高。LIFmRNA表達(dá)明顯上調(diào)，慢性高眼壓后3d表達(dá)最高，LIFRmRNA表達(dá)顯著高于正常對(duì)照組，并于4w時(shí)達(dá)最高水平。下游信號(hào)分子蛋白STAT3、Akt及其磷酸化形式P-STAT3、P-Akt表達(dá)均高于對(duì)照組;與正常對(duì)照相比，慢性高眼壓組ERK表達(dá)水平無明顯變化，P-ERK表達(dá)水平2w時(shí)無明顯變化，3d、1w、3w和4w時(shí)表達(dá)下調(diào)。
　　結(jié)論：LI