IGF-1在Mets大鼠和DM大鼠膀胱中的表達.pdf

1、目的:本實驗通過建立代謝綜合征和2型糖尿病大鼠模型，研究大鼠代謝綜合征及2型糖尿病膀胱病變的鏡下結(jié)構(gòu)表現(xiàn)，運用免疫組化方法檢測代謝綜合征及2型糖尿病大鼠膀胱中胰島素樣生長因子-1(insulin-likegrowth factor1，IGF-1)表達的變化，來探討IGF-1在代謝綜合征及糖尿病膀胱病變發(fā)生發(fā)展中的作用，為進一步阻止和治療其病變提供實驗基礎(chǔ)。
　　方法:成年雄性Wistar大鼠19只，體重150-200g，適應(yīng)性喂養(yǎng)

2、1周后隨機分為三組:正常對照組5只，代謝綜合征組7只，2型糖尿病組7只，正常對照組予以普通飼料喂養(yǎng)，代謝綜合征組及糖尿病組予以高糖高脂飼料（基礎(chǔ)飼料53.5％，豬油20％，蔗糖20％，蛋黃粉25％，膽鹽0.5％，及膽固醇1％組成）喂養(yǎng)。第8周末，測定三組動物空腹血糖、空腹胰島素水平，正常組及代謝綜合征組的空腹血脂水平，應(yīng)用穩(wěn)態(tài)模型評估法(HOMA-IR)=空腹血糖(FBG)×空腹胰島素(FINS)/22.5評價個體的胰島素抵抗水平。糖尿

3、病組大鼠禁食不禁水12h后，按照30mg/Kg單次腹腔注射鏈脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)，其余兩組腹腔注射等量的枸櫞酸緩沖液。注射STZ72小時后，測尾靜脈空腹血糖，以空腹血糖＞16.7mmol/L為糖尿病成功模型，篩選符合條件的糖尿病組大鼠。繼續(xù)正常組普通飼料，代謝綜合征和糖尿病組高糖高脂飼料喂養(yǎng)，每周測定三組大鼠體重、尾靜脈血葡萄糖濃度。飼養(yǎng)至第16周末，測量各組大鼠代謝籠24h飲水量及尿量。將各組大鼠稱重后麻醉

4、（10％水合氯醛，0.3ml/100g，腹腔注射），仰臥位固定后，完整切除膀胱，排凈殘余尿液后稱量膀胱濕重，立即將標本放入固定液，剔除大鼠雙側(cè)腸系膜，附睪旁脂肪及腎周脂肪，濾紙吸干后稱重，代表內(nèi)臟脂肪重量。應(yīng)用HE染色方法，光鏡下觀察三組大鼠膀胱逼尿肌結(jié)構(gòu)，應(yīng)用免疫組化方法，檢測三組大鼠膀胱IGF-1的表達變化。
　　統(tǒng)計學分析:采用SPSS19.0軟件進行統(tǒng)計分析，所有數(shù)據(jù)以均數(shù)加減標準差（(x)±SD）表示，兩兩均數(shù)的比較采用

5、t檢驗或者t'檢驗，三組均數(shù)的比較采用單因素的方差分析(one way analysis of variance，one way ANOVA)。設(shè)定P＞0.05無統(tǒng)計學意義，P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果:
　　1代謝綜合征大鼠模型的建立
　　代謝綜合征組大鼠8周的高脂飼料喂養(yǎng)后，與正常組相比，胰島素抵抗指數(shù)（9.00±0.49VS4.96±0.74），空腹血糖(6.03±0.70VS3.74±0.51

6、 mmol/L)，空腹胰島素（33.83±2.92VS29.82±0.79 ulU/ml），總膽固醇（2.05±0.16VS1.77±0.19 mmol/L）明顯高于對照組(P＜0.05)，表現(xiàn)出了高膽固醇、高血糖（尚未達到糖尿病診斷標準）、高胰島素血癥、胰島素抵抗的狀態(tài)，提示代謝綜合征模型的成立。
　　繼續(xù)高脂飼料喂養(yǎng)至16周，在第8周的基礎(chǔ)上，與正常組相比，甘油三酯（1.13±0.24VS0.74±0.34 mmol/L），低

7、密度脂蛋白(0.38±0.04VS0.32±0.05 mmol/L)，內(nèi)臟脂肪/體重（6.82±0.63VS3.03±0.50％），明顯高于對照組(P＜0.05)，出現(xiàn)了高甘油三酯、高低密度脂蛋白及內(nèi)臟型肥胖表現(xiàn)，提示高脂飼料喂養(yǎng)時間越長，誘導出現(xiàn)代謝綜合征的要素越多。
　　22型糖尿病模型的建立
　　糖尿病組大鼠8周的高脂飼料喂養(yǎng)后，與正常組相比，空腹胰島素(34.64±4.17VS29.82±0.79 uIU/ml)，胰

8、島素抵抗指數(shù)(8.67±1.67VS4.96±0.74)明顯高于對照組(P＜0.05)，提示高胰島素血癥、胰島素抵抗建立，給予腹腔注射STZ，72h后，所有糖尿病組大鼠空腹血糖均＞16.7mmol/L;此時大鼠滿足高胰島素血癥、胰島素抵抗、高血糖（達到糖尿病的診斷標準）狀態(tài)，提示2型糖尿病大鼠模型形成。
　　繼續(xù)高脂飼料喂養(yǎng)至16周，24h飲水量(ml)及尿量(ml)相對于對照組明顯增高(132.40±24.35VS41.60±8

9、.89; P＜0.05)、（92.60±9.56VS5.36±0.58; P＜0.05）;表現(xiàn)出多飲多尿狀態(tài)，胰島素抵抗指數(shù)相對于正常組仍增高(29.02±6.50VS6.04±0.78;P＜0.05)，但血清胰島素水平(uIU/ml)相對于正常組下降（24.83±3.76VS33.36±0.87; P＜0.05），提示隨著糖尿病進展胰島功能受損加重，胰島素分泌降低。
　　3膀胱濕重
　　第16周三組大鼠膀胱濕重比較:正常組

10、、代謝綜合征組、糖尿病組(0.10±0.02、0.10±0.02、0.26±0.07 g)，正常組和代謝綜合征組均低于糖尿病組，均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，正常組與代謝綜合征組比較，無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　4組織學變化
　　糖尿病組:粘膜下可見少許炎細胞浸潤，肌束排列松散，結(jié)構(gòu)紊亂，肌束之間間隙明顯增寬，肌束間血管擴張充血，逼尿肌肌細胞肥大明顯，形態(tài)不一，胞漿空，部分可見淡染顆粒。代謝綜合征組表現(xiàn)出了糖尿病組

11、趨勢。
　　5 IGF-1的表達
　　三組大鼠膀胱IGF-1表達比較:正常組、代謝綜合征組、糖尿病組(0.336±0.011、0.314±0.018、0.212±0.032)，糖尿病組均低于正常組和代謝綜合征組，有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），代謝綜合征組與正常組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1通過高脂喂養(yǎng)大鼠，可以引起胰島素抵抗/高胰島素血癥、血脂紊亂狀態(tài)，即代謝綜合征。
　　2