硫醇轉(zhuǎn)移酶在高糖誘導(dǎo)大鼠糖尿病性白內(nèi)障形成中的作用.pdf

1、目的：
　　硫醇轉(zhuǎn)移酶（Thioltransferase，TTase）是晶狀體內(nèi)重要的氧化還原酶，通過(guò)還原細(xì)胞內(nèi)氧化損傷產(chǎn)生的硫醇化蛋白，來(lái)調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)巰基的穩(wěn)態(tài)，維持細(xì)胞內(nèi)部氧化還原平衡。糖尿病的高血糖狀態(tài)，能通過(guò)多種途徑誘發(fā)氧化應(yīng)激反應(yīng)，導(dǎo)致糖尿病性白內(nèi)障發(fā)生。為進(jìn)一步探究糖尿病性白內(nèi)障與TTase作用之間的關(guān)系，闡明TTase在糖尿病性白內(nèi)障發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制，本研究采用離體糖尿病性白內(nèi)障模型，觀察高糖對(duì)晶狀體氧化損傷修復(fù)系

2、統(tǒng)的影響，分析相關(guān)氧化還原系統(tǒng)指標(biāo)變化，探討TTase對(duì)晶狀體氧化還原系統(tǒng)可能的保護(hù)作用。
　　方法：
　　1.用不同濃度葡萄糖（5.5mmol/L，35.5mmol/L，65.5mmol/L，95.5mmol/L葡萄糖）及相應(yīng)的甘露醇等滲對(duì)照在體外培養(yǎng)大鼠晶狀體7d，建立糖尿病性白內(nèi)障離體動(dòng)物模型，動(dòng)態(tài)觀察晶狀體的混濁情況。測(cè)定晶狀體中TTase、超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)活性，氧化型谷胱甘肽（GSSG

3、）與總谷胱甘肽（T-GSH）的比值。
　　2.根據(jù)不同濃度葡萄糖培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選用35.5mmol/L葡萄糖作為高糖孵育離體大鼠晶狀體，分別于1d、3d、5d和7d測(cè)定各組的TTase活性和GSSG/T-GSH比值，通過(guò)qRT-PCR檢測(cè)各組晶狀體的TTase mRNA相對(duì)含量。并于第7d行晶狀體HE和免疫組化方法觀察TTase表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.高糖組晶狀體較早出現(xiàn)霧狀混濁，在第1d就出現(xiàn)有部分晶狀體出

4、現(xiàn)霧狀混濁，對(duì)照組保持相對(duì)透明（P<0.05）；在高糖刺激下，高糖組GSSG/T-GSH比值均較正常對(duì)照組增加，其組間互相比較無(wú)顯著性差異，相應(yīng)等滲對(duì)照組和正常對(duì)照組比較差異無(wú)顯著性；高糖組的SOD和CAT較正常對(duì)照組降低（P<0.05），不同葡萄糖濃度處理組間差異無(wú)顯著性。TTase活性增加較正常對(duì)照組增加，并在含35.5mmol/L葡萄糖的高糖組中最高（1.743±0.20 mU/mg protein，P<0.01）。
　　2

5、. HE和免疫組化染色結(jié)果顯示，高糖組與正常對(duì)照組比較，晶狀體纖維細(xì)胞呈腫脹、變性、空泡樣變，有較明顯的差別，正常對(duì)照組、等滲對(duì)照組的差異不明顯；高糖組GSSG/T-GSH比例明顯隨時(shí)間增加，1d、3d、5d和7d比值分別為24.89±2.8％、35.99±2.49%、32.81±6.04%和30.99±4.17%，為正常對(duì)照的2.21、3.89、2.38和2.74倍（P<0.01）；在1d、3d、5d和7d時(shí)TTase的活性分別為1.

6、25±0.31 mU/mg protein、1.49±0.23mU/mg protein、1.61±0.20 mU/mg protein和1.91±0.28 mU/mg protein，呈逐漸增長(zhǎng)趨勢(shì)，分別為正常對(duì)照組的1.58、2.28、2.21和2.21倍，且與正常對(duì)照組比較均有顯著性差異（P<0.01）。qRT-PCR檢測(cè)TTase mRNA相對(duì)含量顯示，35.5 mmol/L高糖組在1d時(shí)的表達(dá)為正常對(duì)照組的2.44倍（P>0.

7、05），之后3d、5d、7d的表達(dá)驟然上升后略有下降，分別為正常對(duì)照組的6.58、6.78和3.88倍（P<0.05）。相對(duì)應(yīng)的等滲對(duì)照組與正常組間比較未見(jiàn)顯著性差異
　　結(jié)論：
　　1.高糖環(huán)境可以激活晶狀體內(nèi)的抗氧化系統(tǒng)，使晶狀體發(fā)生抗氧化應(yīng)激反應(yīng)，大量消耗GSH，致GSSG含量相應(yīng)增加，GSSG/T-GSH比例增高，CAT和SOD部分失活，晶狀體抗氧化能力下降。而TTase表達(dá)適應(yīng)性增加、酶活性增高，提示TTase可能

8、參與了對(duì)抗高糖誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激，發(fā)揮著抵抗氧化應(yīng)激、調(diào)節(jié)晶狀體的氧化還原穩(wěn)態(tài)的保護(hù)作用。
　　2.由高糖引起的糖尿病性白內(nèi)障，其在形態(tài)學(xué)上的變化與TTase蛋白表達(dá)之間尚未發(fā)現(xiàn)有直接關(guān)聯(lián)，但 TTase活性于早期就有大幅增加，相應(yīng)時(shí)間里反映晶狀體內(nèi)抗氧化狀態(tài)的GSSG/T-GSH增高。通過(guò)qRT-PCR檢測(cè)各組晶狀體的TTase mRNA相對(duì)含量也證實(shí)了這一點(diǎn)，提示TTase可能在糖尿病性白內(nèi)障發(fā)生的早期就起到重要的保護(hù)作用，從而延