PCOS患者植入窗口期子宮內(nèi)膜CD44v6、E-cadherin和Ang-1的表達(dá)及意義.pdf

1、多囊卵巢綜合征(PCOS)是育齡期婦女常見的生殖功能障礙和代謝紊亂性疾病。PCOS患者雖然經(jīng)過藥物治療糾正內(nèi)分泌紊亂，恢復(fù)正常排卵，但是仍會(huì)出現(xiàn)低妊娠率高流產(chǎn)率的現(xiàn)象。國內(nèi)外大量研究表明，PCOS患者長期內(nèi)分泌紊亂導(dǎo)致造成子宮內(nèi)膜容受性的異?？赡苁窃斐蛇@一現(xiàn)象的原因之一。
　　胚胎成功的植入不僅需要發(fā)育良好的胚胎和容受態(tài)的子宮內(nèi)膜，并且與兩者是否同步發(fā)育也有密切的關(guān)系。子宮內(nèi)膜接受胚胎植入的能力稱為子宮內(nèi)膜容受性。在正常月經(jīng)周期中

2、，月經(jīng)周期的第20-24天（排卵后的6-10天）被稱為子宮內(nèi)膜“植入窗口期”，只有在這個(gè)時(shí)期子宮內(nèi)膜可以接受胚胎的植入。近年來，植入窗口期子宮內(nèi)膜容受性的研究成為國內(nèi)外研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。大量研究表明，激素、基因、分子等均與子宮內(nèi)膜容受性有密切關(guān)系。目前研究發(fā)現(xiàn)，基質(zhì)金屬蛋白酶、同源框基因10、骨橋蛋白、整合素等均被認(rèn)為子宮內(nèi)膜容受性的標(biāo)志物，但是仍不能完全解釋并分析子宮內(nèi)膜容受性建立的分子機(jī)制。CD44分子是一種細(xì)胞表面的跨膜糖蛋白，屬

3、于黏附分子的一種。其基因位于21號(hào)染色體短臂上，分為標(biāo)準(zhǔn)型CD44(eCD44s)及變異型eCD44(eCD44v)。CD44分子主要參與細(xì)胞與細(xì)胞以及細(xì)胞與基質(zhì)之間的特異性黏連的過程。近年來國內(nèi)外對(duì)CD44分子的研究很多，特別是腫瘤方面。CD44有介導(dǎo)淋巴細(xì)胞穿梭和參與淋巴細(xì)胞激活的作用，并且與腫瘤的分化、擴(kuò)散及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。目前有新的研究發(fā)現(xiàn)，CD44分子可在子宮內(nèi)膜特異性表達(dá)，在生殖過程中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。由此推斷，CD44可能

4、參與胚胎植入過程，為子宮內(nèi)膜容受性的標(biāo)志物之一。促血管生成素(Angiopoietin Ang)家族是新發(fā)現(xiàn)的一種血管內(nèi)皮細(xì)胞特異性的促血管生成因子家族，其中Ang-1是血管生成素家族的一員。近年有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，Ang在胚胎、成人的血管組織中均有表達(dá)，在腫瘤、炎癥、創(chuàng)傷等多種病理?xiàng)l件下也會(huì)表達(dá)。粘附-侵襲-血管形成的機(jī)制是胚胎植入過程所必須的。Ang-1可能通過與細(xì)胞外基質(zhì)協(xié)同作用，促使子宮內(nèi)膜局部微環(huán)境改變利于胚泡植入。大量研究表明，

5、Ang-1可能參與子宮內(nèi)膜容受性分子機(jī)制的建立。鈣黏附蛋(cadherin)主要是介導(dǎo)特定器官和組織同型細(xì)胞之間的。根據(jù)其基本特征可以分為四個(gè)家族:經(jīng)典cadherin，橋粒cadherln，原始cadherin和其他cadherin相關(guān)蛋白。E-cadherin屬于經(jīng)典cadherin的一種，介導(dǎo)上皮細(xì)胞間連系和參與組織器官發(fā)生、分化。國外有學(xué)者研究顯示，E-cadherin在子宮內(nèi)膜上皮有表達(dá)并呈周期性變化，并且E-cadherin

6、可能與胚胎著床和滋養(yǎng)細(xì)胞發(fā)生，分化相關(guān)。
　　本課題利用免疫組化S-P法進(jìn)行檢測(cè)CD44v6、E-cadherin及Ang-1在經(jīng)過藥物治療后恢復(fù)正常排卵的PCOS患者及由其他原因所致的不孕患者植入窗口期子宮內(nèi)膜的表達(dá)，分析探討糾正內(nèi)分泌紊亂恢復(fù)正常排卵后的PCOS患者仍存在低妊娠率、高流產(chǎn)率的可能原因。
　　目的：
　　1.研究CD44v6、E-cadherin及Ang-1在實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組植入窗口期子宮內(nèi)膜的組織表達(dá)

7、及與子宮內(nèi)膜容受性的關(guān)系。
　　2.探討CD44v6、E-cadherin及Ang-1與糾正內(nèi)分泌紊亂恢復(fù)正常排卵后的PCOS患者仍存在低妊娠率、高流產(chǎn)率現(xiàn)象的關(guān)系。
　　材料與方法：
　　1.研究對(duì)象
　　實(shí)驗(yàn)組隨機(jī)抽取:2012年8月～2013年2月在鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院門診就診的已婚15例PCOS患者（診斷標(biāo)準(zhǔn)按2003年“鹿特丹”標(biāo)準(zhǔn)），年齡23～35歲，平均年齡(26.73±2.84)歲，符合下列條件:

8、患者經(jīng)過3～6個(gè)月治療內(nèi)分泌測(cè)定正常，月經(jīng)規(guī)律，自然排卵或經(jīng)促排卵治療后可以正常排卵，行陰式B超檢查未發(fā)現(xiàn)卵巢、子宮器質(zhì)性病變，丈夫精液檢查未見異常。
　　對(duì)照組:隨機(jī)抽取2012年8月～2013年2月在鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院門診就診，18例因男方因素或輸卵管因素導(dǎo)致不孕的患者為對(duì)照組，年齡23～35歲，平均年齡(27±3.12)歲。符合如下條件:月經(jīng)規(guī)律，內(nèi)分泌測(cè)定正常，正常排卵，近3個(gè)月未用過激素類藥物，無其他內(nèi)科疾病及并發(fā)癥，

9、陰道B超檢查未發(fā)現(xiàn)子宮、卵巢等器質(zhì)性病變。
　　兩組標(biāo)本均是患者及家屬知情同意后進(jìn)行采集樣本。
　　2.樣本收集及實(shí)驗(yàn)學(xué)方法
　　于排卵期行B超檢測(cè)確定實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組患者卵泡發(fā)育正常并排卵。于排卵后8-11日清晨空腹抽取肘靜脈血4mL，測(cè)定血清中血促人絨毛膜促性腺激素(HCG)值和雌、孕激素(E2、P)水平。若血中HCG數(shù)值＜30IU/L時(shí)，則可認(rèn)為本月經(jīng)周期沒有妊娠的可能。在患者知情同意下，于確定血HCG數(shù)值(□)3

10、0IU/L當(dāng)日下午在無菌操作下用一次性子宮內(nèi)膜吸管進(jìn)行取材。子宮內(nèi)膜組織分別行HE染色并按照Noyes標(biāo)準(zhǔn)來進(jìn)行組織學(xué)分期，免疫組織化法進(jìn)行定性及半定量的測(cè)定子宮內(nèi)膜組織中CD44v6、E-cadherin及Ang-1的表達(dá)。
　　3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)分析軟件，定量資料比較采用t檢驗(yàn)，定性資料比較采用卡方檢驗(yàn)及Fisher's精確概率法，相關(guān)性分析采用pearson相關(guān)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

11、　　結(jié)果：
　　1.實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的基本情況比較:兩組患者基礎(chǔ)內(nèi)分泌水平、體重指數(shù)(BMI)及年齡，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　2.實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組患者植入窗口期血清E2、P水平對(duì)比:兩者患者血清E2水平，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。PCOS組血清P水平低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　3.實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組患者植入窗口期子宮內(nèi)膜厚度比較:實(shí)驗(yàn)組植入窗口期子宮內(nèi)膜厚度低于對(duì)照組，兩組相比差

12、異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　4.CD44v6在實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組植入窗口期子宮內(nèi)膜的表達(dá):CD44v6在兩組子宮內(nèi)膜腺上皮及間質(zhì)細(xì)胞均有表達(dá)，以腺上皮為主。在實(shí)驗(yàn)組植入窗口期子宮內(nèi)膜腺上皮表達(dá)低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　5.E-cadherin在實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組植入窗口期子宮內(nèi)膜的表達(dá):兩組子宮內(nèi)膜均有E-cadherin的表達(dá)，在實(shí)驗(yàn)組植入窗口期子宮內(nèi)膜腺上皮表達(dá)低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

13、＜0.05）。
　　6.Ang-1在實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組植入窗口期子宮內(nèi)膜的表達(dá):Ang-1在實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組子宮內(nèi)膜的基質(zhì)細(xì)胞及腺上皮細(xì)胞中均有表達(dá)，以腺上皮表達(dá)為主，并且在實(shí)驗(yàn)組的表達(dá)水平低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　7.在PCOS患者子宮內(nèi)膜中CD44v6與E-cadherin，E-cadherin與Ang-1以及CD44v6與Ang-1表達(dá)均呈正相關(guān)(P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.C