人未成熟卵母細(xì)胞在T199和P1兩種培養(yǎng)體系體外成熟的初步研究.pdf

1、廣州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文人未成熟卵母細(xì)胞在T199和P1兩種培養(yǎng)體系體外成熟的初步研究姓名：石宇申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師：黃艷儀;龍曉林20030530墨主蘭竺蘭圣 全圭墨登竺竺竺墨查墜塑竺：! 苧蘭蘭苧蘭至竺塵墨墊蘭竺= 2 墨 土蘭苧苧體外D O 成熟的研究是十分迫切和必要的。卵母細(xì)胞的自身代謝尚需要不斷的研究和探索；實(shí)際科研和工作中，經(jīng)常會(huì)遇到許多D O 。每個(gè)單精子卵胞漿內(nèi)注射( i n t r a c y t o

2、 p l a s m i cs p e r mi n j e c t i o n ，I C S I ) 周期，與體外受精( I n v i t r om a t u r a t i o n ，I V F ) 一樣大約都會(huì)有1 5 ％一2 0 ％的未成熟卵母細(xì)胞。培養(yǎng)D O 優(yōu)勢(shì)還在于它能夠避免顆粒細(xì)胞對(duì)卵母細(xì)胞成熟度的觀察的干擾，有利于探討I V M 的培養(yǎng)時(shí)間。目前，I V M 的研究存在的問題之一是：培養(yǎng)體系的優(yōu)化。本課題在以往的研

3、究基礎(chǔ)之上，應(yīng)用T 1 9 9 和P 1 兩種培養(yǎng)體系，從4 0 歲以下，既往月經(jīng)規(guī)律，1 0 m m 以下的卵泡獲取的未成熟卵母細(xì)胞，分為自然周期、孕期和促排周期進(jìn)行O C C 或D O 培養(yǎng)，通過觀察其成熟率，第一極體的形態(tài)，及成熟時(shí)間( D O 組) 上的差異，摸索O C C 或D O的適宜的培養(yǎng)體系。同時(shí)通過自然周期、孕期和促排周期G V 期卵母細(xì)胞以上各項(xiàng)指標(biāo)，比較不同來源途徑的I V M 的區(qū)別。材料與方法1 ．標(biāo)本來源：因

4、婦科良性病變( 包括卵巢巧克力囊腫、子宮內(nèi)膜異位癥、卵巢畸胎瘤)而切除的卵巢標(biāo)本，或其它婦產(chǎn)科開腹手術(shù)( 子宮肌瘤、黃體破裂和剖宮產(chǎn)) 直視穿刺卵泡及I C S I 獲得未成熟卵母細(xì)胞。共獲得1 8 4 顆符合標(biāo)準(zhǔn)的未成熟卵，其中4 8 顆來源于自然周期；1 2 0 顆孕期；1 6 顆來自促排周期。2 ．培養(yǎng)體系：T 1 9 9 培養(yǎng)液和P 1 培養(yǎng)液均加入I O ％S S S 、M e t r o d i n ( 0 ．0 7 5 I

5、 U ／m 1 ) 、P e r g o n a l ( 0 ．1 5 I U ／m 1 ) 、P r o f a s i ( 05 I U ／m 1 ) 、E 2 ( 1 u g ／m 1 ) 、此外，T 1 9 9 還加入了丙酮酸鈉( O ．0 3 6 9 ／L ) 、青霉素( 2 4 0 I U ／m 1 ) 和鏈霉素( 3 7 0 I U ／m 1 ) ；P 1 培養(yǎng)液加入L 一谷氨酰胺( 1 m m 0 1 ) 。3 ．不成熟

6、卵母細(xì)胞的收集標(biāo)準(zhǔn)：O C C 兩層以上的完整的卵丘細(xì)胞緊密包繞，外觀顏色正常：D O 細(xì)胞質(zhì)顏色正常，顆粒均勻，胞膜光、滑，卵周隙正常。4 ．不成熟卵母細(xì)胞的收集方法①切除的卵巢組織分離②術(shù)中直視穿刺竇卵泡( 卵泡直徑均< 1 0 m m )⑨I C S I 時(shí)發(fā)現(xiàn)的未成熟卵母細(xì)胞。④D 0 制備：O C C 酶解或機(jī)械法去顆粒細(xì)胞5 ． 實(shí)驗(yàn)分組：將相同來源的符合標(biāo)準(zhǔn)的O C C 或D O 隨機(jī)置入T 1 9 9 或P I 培