寡糖的基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜分析方法研究.pdf

1、寡糖(Oligosaceharides)是生物體內(nèi)重要的信息物質(zhì)。寡糖的諸多生物學(xué)功能決定了它在醫(yī)藥領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用前景。近些年來對寡糖的生物活性研究的非常多，表現(xiàn)在免疫調(diào)節(jié)功能、抗腫瘤、抗病毒、抗氧化、抗凝血、抗血栓、降血糖、降血脂等多種作用。寡糖作為一類新的生理活性物質(zhì)，在營養(yǎng)與保健、疾病診斷與防治方面的應(yīng)用有著極大潛力。 基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜(matrix-assisted laser desorptioni

2、onization time of flight mass spectrometry MALDI-TOF-MS)是最近發(fā)展起來的一種軟電離質(zhì)譜分析技術(shù)，與傳統(tǒng)分析技術(shù)如氣相色譜技術(shù)、液相色譜技術(shù)、毛細(xì)管電泳技術(shù)及其他質(zhì)譜電離源分析技術(shù)相比較，MALDI具有靈敏度高；高通量；對樣品的純度要求不高，可以直接分析未處理過的生物樣品等許多優(yōu)點(diǎn)；MALDI-TOF-MS能提供寡糖直觀的分子量和結(jié)構(gòu)信息，實(shí)現(xiàn)檢測和鑒定的目的。 本研究通過對

3、MALDI-TOF-MS分析中性寡糖和酸性寡糖的方法進(jìn)行系統(tǒng)的研究，旨在找到合適的分析中性與酸性寡糖的基質(zhì)，闡明影響MALDl分析的重要實(shí)驗(yàn)因素的作用，對基質(zhì)作用的機(jī)理進(jìn)行了探討，并建立MALDI-TOF．MS分析寡糖的實(shí)驗(yàn)方法，從而實(shí)現(xiàn)對不同類型寡糖的分析，豐富了寡糖的分離分析技術(shù)。 根據(jù)研究目的，選擇以下寡糖進(jìn)行試驗(yàn)：中性寡糖包括還原型的中性寡糖和非還原型的中性寡糖；酸性寡糖包括含糖醛酸的酸性寡糖，含唾液酸的酸性寡糖和含硫酸

4、基團(tuán)的酸性寡糖。在試驗(yàn)中，以葡聚糖、棉子糖和古羅糖醛酸三糖為寡糖模型，試驗(yàn)了不同的基質(zhì)包括單一基質(zhì)和混合基質(zhì)，和不同的實(shí)驗(yàn)因素包括基質(zhì)、基質(zhì)濃度、混合基質(zhì)配比、點(diǎn)樣方法，檢測模式。通過MALDI～TOF-MS分析提供的各種寡糖的質(zhì)量信息，應(yīng)用MassLynx V4.0軟件進(jìn)行比較分析，確定標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)方法和影響分析結(jié)果的重要實(shí)驗(yàn)因素。在標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)方法建立后，對方法的重復(fù)性包括同一樣品的重復(fù)性和批間樣品的重復(fù)性，及方法的適用性包括標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)方法

5、對其它寡糖的適用性進(jìn)行了系統(tǒng)的試驗(yàn)，從而能夠應(yīng)用于分析不同來源的中性和酸性寡糖。 本研究完成了MALDI-TOF-MS分析寡糖的標(biāo)準(zhǔn)方法，首次使用二元混合基質(zhì)對所選中性寡糖與酸性寡糖(特別是褐藻膠寡糖)進(jìn)行MALDI-TOF-MS分析，闡明了影響MALDl分析寡糖的重要實(shí)驗(yàn)因素，分析過程證明簡單、快速、重復(fù)性較好。許多研究表明。對不同糖類或以不同方式制樣的同一樣品都有可能使用不同的基質(zhì)。目前對寡糖MALDI-TOF-MS分析基質(zhì)