利用表面增強激光解析電離飛行時間質(zhì)譜技術(shù)快速檢測甲型副傷寒門氏菌的研究.pdf

1、目的：利用表面增強激光解析電離飛行時間質(zhì)譜(surface enhancedlaser desorption& ionization time-of-flight mass spectrometry，SELDI-TOF-MS)建立甲型副傷寒沙門氏菌蛋白指紋圖譜，并通過與分子生物學方法鑒定結(jié)果比較，驗證其診斷效率，為快速鑒定該細菌提供新的思路。
　　方法：1.收集從臨床中分離獲得的甲型副傷寒沙門氏菌36株。2.對所收集的細菌利用16

2、S rRNA測序技術(shù)進行分子生物學鑒定。3.利用表面增強激光解析電離飛行時間質(zhì)譜檢測細菌蛋白，ProteinChip和Biomarker Wizard軟件自動采集數(shù)據(jù)，并分析所得的細菌蛋白指紋圖譜。4.對同一株細菌的蛋白進行多次檢測并分析其蛋白指紋圖譜差異，評價方法的重復性。5.同種細菌不同株之間蛋白指紋圖譜差異進行比較，對細菌蛋白表達的穩(wěn)定性進行分析。6.通過比較不同培養(yǎng)時間下細菌蛋白指紋圖譜差異，驗證培養(yǎng)時間對細菌蛋白指紋圖譜的影響

3、。7。將132株菌株分成訓練組和驗證組，分別檢測其蛋白表達，分析其蛋白指紋圖譜，將結(jié)果用BioMarker Patterns軟件建立分類樹鑒定模型，并進行盲法驗證。
　　結(jié)果：1.PCR產(chǎn)物測序比對，一致性≥98.5％，鑒定為相應的細菌該結(jié)果與傳統(tǒng)的微生物鑒定結(jié)果相符。2.在分子量3000～20000Da范圍內(nèi)，104個蛋白峰被捕獲，90個蛋白峰有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。3.細菌蛋白的孔間重復性和芯片間重復性檢測好，重復檢測的

4、同一株細菌具備相似的蛋白指紋圖譜。4.同種細菌不同株之間蛋白指紋圖譜表達穩(wěn)定，共有蛋白峰分子量變異系數(shù)≤0.5％。5.細菌蛋白指紋圖譜受不同的培養(yǎng)時間影響不大。6.本研究擇優(yōu)選出質(zhì)荷比(M/Z)為10061.7的蛋白峰建立甲型副傷寒沙門氏菌的分類樹模型，甲型副傷寒沙門氏菌診斷的靈敏度和特異度通過驗證為100％。
　　結(jié)論：使用AU蛋白芯片，采用SELDI-TOF-MS技術(shù)，可建立甲型副傷寒沙門氏菌的分類樹診斷模型，可用于快速鑒定甲